Питательная селективная среда HiMedia SMH118D-5X500ML Агар с маннитом и солью (5×500 мл) производства HiMedia для селективного выделения патогенных стафилококков, содержит 7,5 % хлорида натрия. Среда применяется для микробиологических предельных испытаний фармацевтической продукции и анализа клинических образцов, при этом предполагаемые коагулазоположительные колонии требуют подтверждения коагулазным тестом.

Назначение

Среда предназначена для селективного выделения патогенных стафилококков из фармацевтических продуктов в соответствии с микробиологическим предельным испытанием по гармонизированной методике USP/EP/BP/JP/IP.

Тип среды: готовая к применению плотная среда во флаконе из стекла.

Форма поставки: 5 флаконов по 500 мл.

Состав

Состав на 1 л:

Пептический перевар тканей животного происхождения

Панкреатический перевар казеина

Эквивалент экстракта говядины

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам рабочих характеристик среды.

Приготовление и порядок работы

Mannitol Salt Agar представляет собой готовую к применению плотную среду во флаконе из стекла. Среда предварительно стерилизована и не требует дополнительной стерилизации.

1. Расплавьте среду во флаконе на предварительно нагретой водяной бане или другим подходящим способом.
2. Перед расплавлением слегка ослабьте крышку флакона.
3. После полного расплавления среды разлейте её в пробирки для приготовления столбиков или скосов либо в чашки в требуемом формате.
4. Оставьте среду до затвердевания.
5. При использовании чашки асептически нанесите исследуемый инокулят штриховым посевом, внесением в среду или поверхностным распределением. Посевная доза: 50–100 КОЕ.

Принцип действия и интерпретация результатов

Стафилококки широко распространены в природе и преимущественно обнаруживаются на коже, в кожных железах и на слизистых оболочках млекопитающих и птиц. Коагулазоположительный вид Staphylococcus aureus является документированным условно-патогенным микроорганизмом человека. Способность свёртывать плазму продолжает оставаться наиболее широко применяемым и признанным критерием идентификации патогенных стафилококков, связанных с острыми инфекциями (13).

Стафилококки обладают специфической способностью расти на средах с высоким содержанием соли (11). Выделение коагулазоположительных стафилококков на агаре с маннитом и феноловым красным, дополненном 7,5 % NaCl, было изучено Chapman (3). Полученная основа агара с маннитом и солью рекомендована для выделения коагулазоположительных стафилококков из косметической продукции, молока, пищевых продуктов и других образцов (13,1,4,6,14).

Липазную активность Staphylococcus aureus можно выявить добавлением эмульсии яичного желтка (FD045). Липазная активность визуализируется по жёлтым непрозрачным зонам вокруг колоний (7). Среда также используется при проведении микробиологических предельных испытаний для селективного выделения Staphylococcus. Рецептура соответствует гармонизированным методикам USP/EP/BP/JP/IP (15,5,2,10,8).

HM-пептон B, триптон и пептон обеспечивают высокую питательность среды, являясь источниками углерода, азотистых соединений, длинноцепочечных аминокислот, витаминов, других необходимых факторов роста и микроэлементов. Многие бактерии, кроме стафилококков, подавляются 7,5 % хлоридом натрия.

Маннит является сбраживаемым углеводом. Его ферментация приводит к образованию кислоты, которая выявляется индикатором феноловым красным.

S.aureus сбраживает маннит, образуя жёлтые колонии, окружённые жёлтыми зонами. Коагулазонегативные штаммы S.aureus обычно не сбраживают маннит, поэтому формируют колонии от розового до красного цвета, окружённые красно-фиолетовыми зонами.

Предположительно коагулазоположительные жёлтые колонии S.aureus необходимо подтвердить коагулазным тестом в пробирочном или предметно-стекольном варианте (13). Липазную активность S.aureus выявляют добавлением эмульсии яичного желтка.

Тип образцов

• Фармацевтические образцы.
• Клинические образцы: образцы гноя.

Отбор и обращение с образцами

Для фармацевтических образцов необходимо применять подходящие методы отбора и обработки образцов в соответствии с установленными руководствами (2,5,8,10,15).

Для клинических образцов необходимо применять подходящие методы обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами (4,6).

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Перед открыванием флакона прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения метода

• Среда является селективной; некоторые штаммы Staphylococcus aureus могут характеризоваться замедленной ферментацией маннита.
• Некоторые бактерии, не относящиеся к Staphylococcus, также ферментируют маннит, поэтому для идентификации требуется дополнительное биохимическое тестирование.
• Возможный S.aureus необходимо подтвердить коагулазным тестом.
• Для исключения возможного влияния соли на коагулазный тест или другие диагностические исследования культуру следует пересевать на менее ингибирующую среду, не содержащую избыток соли, например на питательный бульон (Nutrient Broth) (M002) (12).
• Некоторые штаммы S.aureus могут характеризоваться замедленной ферментацией маннита.
• Отрицательные результаты перед утилизацией следует повторно инкубировать ещё 24 ч (12).

Рабочие характеристики и оценка

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с указаниями на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

Внешний вид

Стерильный стеклянный флакон, содержащий слегка опалесцирующую среду Mannitol Salt Agar.

Цвет

Среда красного цвета.

Количество среды

500 мл среды во флаконе из стекла.

Тест на ростовые свойства

Тест на ростовые свойства выполняли в соответствии с гармонизированной методикой USP/EP/BP/JP/IP после инкубации при 30–35 °C в течение 18–72 ч.

Степень восстановления принимают равной 100 % для роста бактерий на агаре с переваром соевых бобов и казеина.

Ростовые свойства

Рост микроорганизма, сопоставимый с ростом, ранее полученным для протестированной и утверждённой партии среды, наблюдается при указанной температуре за период, не превышающий минимальное установленное время, при внесении ≤100 КОЕ: 30–35 °C в течение ≤18 ч.

Индикаторные свойства

Внешний вид колоний и индикаторная реакция сопоставимы с результатами, ранее полученными для протестированной и утверждённой партии среды, при указанной температуре в течение времени, находящегося в установленном диапазоне, при внесении ≤100 КОЕ: 30–35 °C в течение 18–72 ч.

Ингибирующие свойства

Рост тестового микроорганизма отсутствует при указанной температуре в течение периода не менее максимального установленного времени, при внесении ≥100 КОЕ: 30–35 °C в течение ≥72 ч.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют при инкубации при 30–35 °C в течение 18–72 ч, если иное не указано в таблице.