Питательная агаризованная среда Агар Мюллера-Хинтона HiMedia М173-500G (уп./500 гр.) производства HiMedia предназначена для микробиологических исследований и определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным средствам. Агар Мюллера—Хинтона применяют для культивирования нейссерий и проведения диско-диффузионных тестов с клиническими изолятами; конечный pH среды составляет 7,3 ± 0,1 при 25 °C.

Назначение

Среда рекомендована для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным средствам, выделенных из клинических образцов. Исходный материал: чистые культуры, выделенные из мочи, кала, крови и других клинических образцов.

Изделие предназначено только для диагностики in vitro и профессионального применения.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик. Объёмные доли указаны на 1 л среды.

Эквивалент настоя из говяжьего сердца.

Эквивалент гидролизата казеина кислотным способом.

• Конечный pH: 7,3 ± 0,1 при 25 °C.
• Физическая форма: порошок.
• Тип продукта: стандартный.
• Материал упаковки: ПЭВП (полиэтилен высокой плотности).
• Происхождение компонентов: животное.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 38,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/дюйм² (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Рабочие характеристики партии проверены и стандартизированы в соответствии с действующим документом CLSI, ранее NCCLS, M6 — протоколами оценки сухой среды Мюллера—Хинтона.

Принцип действия и интерпретация

Изначально формула Мюллера—Хинтона была разработана как простая прозрачная агаровая среда для культивирования патогенных видов Neisseria. Позднее для культивирования патогенных видов Neisseria были разработаны другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение при определении устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфонамидам.

В настоящее время агар Мюллера—Хинтона используют как тестовую среду для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным средствам. Среда предназначена для диффузии антимикробных средств, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель.

Среда выбрана для тестирования чувствительности по следующим техническим причинам:

1. Обеспечивает хорошую воспроизводимость результатов тестирования от партии к партии.
2. Содержит низкие концентрации ингибиторов сульфонамидов, триметоприма и тетрациклина.
3. Поддерживает рост большинства неприхотливых патогенных бактерий.
4. Для среды накоплены значительный массив данных и практический опыт применения.

Кирби—Бауэр рекомендовали агар Мюллера—Хинтона для проведения тестов чувствительности к антибиотикам с использованием одного диска с высокой концентрацией антибиотика. Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности принял агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов.

Для определения чувствительности Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae рекомендованы варианты агара Мюллера—Хинтона с добавлением 5 % крови овцы и агар Мюллера—Хинтона с гемоглобином.

Настой HM B и ациказа поставляют азотистые соединения, углерод, серу и другие необходимые питательные вещества. Крахмал действует как защитный коллоид, связывающий токсичные вещества, присутствующие в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина, которое оценивают по значениям минимальной подавляющей концентрации для Enterococcus faecalis при использовании комбинации сульфаметоксазола и триметоприма (SXT).

Диско-диффузионный метод Кирби—Бауэра

Метод Кирби—Бауэра основан на диффузии антимикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, в агаровую среду. Каждый диск содержит антимикробное средство в одной концентрации. Диаметры зон задержки роста сопоставляют со значениями минимальной подавляющей концентрации.

Стандартизированную суспензию исследуемого микроорганизма распределяют тампоном по всей поверхности среды. Затем на поверхность агара помещают бумажные диски, пропитанные определённым количеством антимикробных средств, инкубируют посевы и измеряют зоны задержки роста вокруг дисков. Чувствительность определяют сравнением полученных диаметров с критериями CLSI.

На результаты диско-диффузионного теста влияют:

• глубина слоя агара;
• активность диска;
• концентрация посевного материала;
• pH среды;
• продукция β-лактамазы исследуемыми микроорганизмами.

Ограничения метода и среды

Агар Мюллера—Хинтона не предназначен для диско-диффузионного определения чувствительности медленно растущих микроорганизмов, анаэробов и капнофилов. При медленном росте увеличение времени инкубации может привести к разрушению диффундирующего антибиотика и получению неточных результатов.

1. Среда рекомендована для тестирования чувствительности только чистых культур.
2. Плотность посевного материала может изменять размер зоны задержки роста: слишком высокая плотность может приводить к уменьшению зон, а слишком низкая — к их увеличению.
3. Требовательные микроорганизмы могут не расти на этой среде; для них может потребоваться добавление крови.
4. Требовательные анаэробные микроорганизмы могут не расти на этой среде.
5. Поскольку определение чувствительности проводят с использованием дисков с антибиотиками, необходимо соблюдать условия хранения дисков; нарушение хранения может изменить их активность.
6. В отдельных случаях результаты определения чувствительности in vitro могут не совпадать с результатами in vivo.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с пробами согласно утверждённым лабораторным руководствам и методикам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид порошка

Внешний вид: однородный, свободно сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с гелем из 1,7 % агара.

Внешний вид приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета в чашках Петри.

Реакция среды

Реакция: водный раствор с концентрацией 3,8 % масс./об. при 25 °C.

• pH: 7,20–7,40.
• Номинальный pH: 7,3 ± 0,1 при 25 °C.

Культуральные характеристики и условия контроля

Испытания чувствительности к антибиотикам выполняют в соответствии с действующей ISO/TS 16782; среда должна соответствовать установленным пределам приемлемости. Рабочие характеристики среды проверяют в соответствии с руководствами CLSI и EUCAST.

Для тестирования Streptococcus pneumoniae среду дополняют 5 % конской крови и 20 мг/л НАД, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Для тестирования Haemophilus influenzae среду дополняют 5 % конской крови и 20 мг/л НАД, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Тест на чувствительность к антибиотикам

Различные диски испытывают со стандартными штаммами ATCC; зоны задержки роста измеряют после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч. Испытание проводят в соответствии с последним протоколом CLSI M6 и действующими стандартами CLSI M100.

Содержание тимина и тимидина

Зоны задержки роста для указанных дисков служат показателем содержания тимина и тимидина в среде.

Содержание двухвалентных катионов

Зоны задержки роста для указанных дисков служат показателем содержания двухвалентных катионов в среде.

Культурные характеристики и контрольные зоны задержки роста: