Готовая стерильная питательная среда HiMedia SMH118-5X100ML Агар с маннитом и солью (5×100 мл) для селективного выделения и пересевания Staphylococcus aureus. Среда применяется при контроле фармацевтических образцов и содержит 7,5 % хлорида натрия, подавляющего рост многих бактерий, кроме стафилококков.

Назначение

Среда рекомендована для селективного выделения и пересевания Staphylococcus aureus в соответствии с гармонизированной методикой USP/EP/BP/JP/IP.

Тип образца: фармацевтические образцы.

Состав

• Пептический перевар тканей животного происхождения.

• Панкреатический перевар казеина.

• Эквивалент мясного экстракта.

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности среды.

Принцип действия и интерпретация результатов

Стафилококки широко распространены в природе и преимущественно обнаруживаются на коже, в кожных железах и на слизистых оболочках млекопитающих и птиц. Коагулазоположительный вид Staphylococcus aureus является известным условно-патогенным микроорганизмом человека. Способность свертывать плазму остаётся наиболее распространённым и признанным критерием идентификации патогенных стафилококков, связанных с острыми инфекциями (1).

Стафилококки обладают характерной способностью расти на средах с высоким содержанием соли (2). Выделение коагулазоположительных стафилококков на маннитно-солевом агаре с феноловым красным и добавлением 7,5 % NaCl было изучено Чапманом (3). Полученная основа маннитно-солевого агара рекомендована для выделения коагулазоположительных стафилококков из косметических средств, молока, пищевых продуктов и других образцов (1, 4, 5, 6, 7). Среда также используется при проведении испытаний на микробиологическую чистоту для селективного выделения Staphylococcus. Состав соответствует гармонизированной методике USP/EP/BP/JP/IP (8–12).

HM-пептон B, триптон и пептон обеспечивают среду питательными веществами: углеродом, соединениями азота, аминокислотами с длинной цепью, витаминами, другими факторами роста и микроэлементами. Рост многих бактерий, за исключением стафилококков, подавляется 7,5 % хлорида натрия. Маннит является сбраживаемым углеводом; его ферментация приводит к образованию кислоты, которое выявляется по изменению окраски индикатора фенолового красного.

Staphylococcus aureus сбраживает маннит и образует жёлтые колонии, окружённые жёлтыми зонами. Предположительно коагулазоположительные жёлтые колонии S. aureus необходимо подтверждать коагулазным тестом в пробирке или на предметном стекле (1). Возможный S. aureus должен быть подтверждён коагулазным тестом.

После выделения микроорганизм следует пересевать на менее ингибирующую среду, не содержащую избытка соли, чтобы избежать возможного влияния соли на коагулазный тест и другие диагностические исследования, например на питательный бульон (M002) (13). Некоторые штаммы S. aureus могут иметь замедленную ферментацию маннита. Поэтому отрицательные результаты перед выбраковкой следует повторно инкубировать ещё 24 часа (14).

Методика подготовки и применения

Маннитно-солевой агар представляет собой готовую к применению твёрдую питательную среду в стеклянном флаконе. Среда предварительно стерилизована и не требует дополнительной стерилизации.

1. Перед плавлением слегка ослабьте крышку флакона.
2. Расплавьте среду в предварительно нагретой водяной бане или другим подходящим способом.
3. После полного расплавления среды разлейте её в пробирки для формирования столбиков или скошенных поверхностей либо в чашки в зависимости от требуемого формата.
4. Оставьте среду до затвердевания.
5. При использовании чашки асептически нанесите исследуемый инокулят штриховым посевом, инокуляцией или поверхностным распределением. Посевная доза: 50–100 КОЕ.

Пробоподготовка и режим инкубации

Обогащение

Для фармацевтических образцов используйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно руководствам (8–12).

1. Первоначально обогатите образец в триптон-соевом бульоне (MH011).
2. Инкубируйте при 30–35 °C в течение 18–24 ч.

Селективное выделение и пересев

1. Пересевайте обогащённую культуру на маннитно-солевой агар (MPH118).
2. Инкубируйте при 30–35 °C в течение 18–72 ч.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Среда является селективной; некоторые штаммы Staphylococcus aureus могут демонстрировать замедленную ферментацию маннита.
2. Маннит могут сбраживать некоторые другие бактерии, не относящиеся к роду Staphylococcus, поэтому для идентификации требуются дополнительные биохимические исследования.
3. Отдельные микроорганизмы различаются по требованиям к росту и могут демонстрировать различающиеся характеристики роста на среде.
4. Каждая партия среды проверена на микроорганизмы, указанные в сертификате анализа (COA). При работе с конкретным микроорганизмом, не указанным в сертификате анализа, рекомендуется валидировать среду с учётом специфических требований пользователя.
5. Для минимизации образования конденсата рекомендуется хранить чашки при 24–30 °C.

Эффективность и оценка

Ожидаемая эффективность среды обеспечивается при применении в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

Внешний вид: стерильный маннитно-солевой агар во флаконах.

Цвет среды: красная среда.

Количество среды: 100 мл среды во флаконе.

pH: 7,20–7,60.

Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска.

Испытание ростовых свойств

Испытание ростовых свойств проведено в соответствии с гармонизированной методикой USP/EP/BP/JP/IP после инкубации при 30–35 °C в течение 18–72 ч. Коэффициент восстановления при росте бактерий принимается равным 100 % по отношению к соево-казеиновому агару.

Ростовые свойства

Рост микроорганизма, сопоставимый с ранее полученным при использовании предварительно испытанной и одобренной партии среды, наблюдается при заданной температуре за период, не превышающий минимальное установленное время, при посевной дозе ≤100 КОЕ: 30–35 °C, ≤18 ч.

Индикаторные свойства

Колонии сопоставимы по внешнему виду и индикаторной реакции с колониями, полученными ранее при использовании предварительно испытанной и одобренной партии среды, при заданной температуре в течение периода, соответствующего установленному диапазону, при посевной дозе ≤100 КОЕ: 30–35 °C, 18–72 ч.

Ингибирующие свойства

Рост тестового микроорганизма отсутствует при заданной температуре в течение периода не менее максимального установленного времени, при посевной дозе ≥100 КОЕ: 30–35 °C, ≥72 ч.

Культуральные характеристики

• * Соответствующие номера WDCM.
• # Ранее микроорганизм назывался Enterobacter aerogenes.

Хранение и срок годности

Условия хранения при получении: 15–30 °C.

Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

Для обеспечения заявленной эффективности рекомендуется использовать среду в течение установленного срока