Питательная микробиологическая среда Агар Мюллера-Хинтона HiMedia SM173 с конечным pH 7,3 ± 0,1. Агар Мюллера-Хинтона HiMedia SM173 предназначен для культивирования нейссерий и определения чувствительности чистых культур микроорганизмов к антимикробным препаратам методом диско-диффузии.

Назначение

Среда рекомендована для определения чувствительности микроорганизмов, выделенных из клинических образцов, к антимикробным препаратам. Исследование проводят только с чистыми культурами.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с рабочими параметрами.

• Эквивалент настоя из говяжьего сердца.

• Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Методика приготовления и использования

Агар Мюллера-Хинтона поставляется в готовом к применению виде в стеклянном флаконе. Среда предварительно стерилизована и не требует дополнительной стерилизации.

1. Слегка ослабьте крышку перед расплавлением среды.
2. Расплавьте среду во флаконе на предварительно нагретой водяной бане или другим подходящим способом.
3. После полного расплавления разлейте среду в пробирки для приготовления столбиков или скошенных поверхностей либо в чашки в зависимости от требуемого формата.
4. Оставьте среду до затвердевания.
5. При использовании чашки выполните асептический посев исследуемого инокулята штриховым методом, внесением на поверхность или распределением по поверхности среды.
6. Посевная доза: 50–100 КОЕ.

Принцип и интерпретация

Формула Мюллера–Хинтона первоначально была разработана как простая прозрачная агаризованная среда для культивирования патогенных видов Neisseria (1). Позднее для культивирования патогенных видов Neisseria были разработаны другие среды, однако агар Мюллера–Хинтона получил широкое применение при определении устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфонамидам.

В настоящее время агар Мюллера–Хинтона используют в качестве тестовой среды для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (2). Среда рекомендована для диффузии антимикробных препаратов, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель в соответствии с утверждённым стандартом CLSI (3).

Среда была выбрана CLSI по следующим причинам:

1. Обеспечивает хорошую воспроизводимость результатов определения чувствительности от партии к партии.
2. Содержит низкие концентрации ингибиторов сульфонамидов, триметоприма и тетрациклина.
3. Поддерживает рост большинства неприхотливых патогенных бактерий.
4. Для среды накоплены значительный объём данных и практический опыт оценки рабочих характеристик (4).

Kirby–Bauer рекомендовали эту среду для проведения тестов чувствительности к антибиотикам с использованием одного диска высокой концентрации (5). Комитет ВОЗ по стандартизации определения чувствительности принял агар Мюллера–Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря его воспроизводимости (6).

Агар Мюллера–Хинтона с 5 % бараньей крови и агар Мюллера–Хинтона с гемоглобином рекомендованы для определения чувствительности к антимикробным препаратам Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae.

Настой HM B и ациказа обеспечивают среду азотистыми соединениями, углеродом, серой и другими необходимыми питательными веществами. Крахмал действует как защитный коллоид против токсичных веществ, присутствующих в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты выбраны с низким содержанием тимина и тимидина, определённым по значениям минимальной ингибирующей концентрации для Enterococcus faecalis при использовании сульфаметоксазола и триметоприма (SXT).

Метод диско-диффузии Kirby–Bauer

Метод Kirby–Bauer основан на диффузии антимикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, в агаровой среде. Для метода используют диск с одной концентрацией антимикробного препарата; измеренные диаметры зон подавления роста коррелируют со значениями минимальной ингибирующей концентрации (МИК) (7, 1, 2).

1. Стандартизированную суспензию исследуемого микроорганизма равномерно наносят тампоном на всю поверхность среды.
2. На поверхность среды помещают бумажные диски, пропитанные определёнными количествами антимикробных препаратов.
3. Посевы инкубируют.
4. Измеряют зоны подавления роста вокруг каждого диска.
5. Чувствительность определяют сравнением результатов со стандартами CLSI (4).

На результаты диско-диффузионного теста влияют:

• глубина слоя агара;
• активность диска;
• концентрация инокулята;
• pH среды;
• продукция β-лактамазы исследуемыми микроорганизмами (4, 8).

Тип образца

Клинические образцы: чистые культуры, выделенные из мочи, кала, крови и других материалов.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами (2, 10–13).

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Указания по безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Среда рекомендована только для определения чувствительности чистых культур.
2. Плотность инокулята может влиять на размер зоны подавления роста: слишком плотный инокулят может привести к уменьшению зон, а слишком редкий — к их увеличению.
3. Требовательные микроорганизмы могут не расти на этой среде и нуждаться в добавлении крови.
4. Требовательные анаэробные микроорганизмы могут не расти на этой среде.
5. Поскольку определение чувствительности проводят с использованием дисков с антибиотиками, необходимо соблюдать условия хранения дисков; нарушение хранения может повлиять на их активность.
6. В некоторых случаях результаты определения чувствительности in vitro могут не соответствовать результатам in vivo.

Рабочие характеристики

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно указаниям на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

Внешний вид

Стерильный стеклянный флакон со слегка опалесцирующим агаром Мюллера–Хинтона.

Цвет среды

Светло-янтарный.

Количество среды

100 мл среды в стеклянном флаконе.

pH

7,20–7,40.

Контроль стерильности

Соответствует критериям выпуска.

Культуральные характеристики

Тесты чувствительности к антибиотикам проводят в соответствии с действующей версией ISO/TS 16782; результаты должны соответствовать установленным пределам приемки (15). Рабочие характеристики среды проверяют в соответствии с руководствами CLSI и EUCAST.

Тест на чувствительность к антибиотикам

Различные диски испытывали на стандартных штаммах ATCC. Диаметры зон подавления роста измеряли после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч. Испытания выполняли в соответствии с последним протоколом CLSI M6 и стандартами действующей версии CLSI M100.

Содержание тимина и тимидина

Диаметры зон для указанных дисков характеризуют содержание тимина и тимидина в среде.

Содержание двухвалентных катионов

Диаметры зон для указанных дисков характеризуют содержание двухвалентных катионов в среде.