Готовая к применению агаризованная питательная среда HiMedia SM173-5X100ML Агар Мюллера—Хинтона (5×100 мл), производитель HiMedia, предварительно стерилизована и предназначена для диско-диффузионного определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Среда используется для анализа чистых культур, выделенных из клинических образцов, при конечном pH 7,3 ± 0,1 и объёме 100 мл во флаконе.

Назначение

Агар Мюллера—Хинтона рекомендован для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам, выделенных из клинических образцов.

Тип образца: клинические образцы — чистые культуры, выделенные из мочи, кала, крови и других материалов.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Эквивалент настоя бычьего сердца.

Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Принцип действия и интерпретация

Изначально рецептура агара Мюллера—Хинтона была разработана как простая прозрачная агаризованная среда для культивирования патогенных видов Neisseria. Впоследствии для культивирования патогенных видов Neisseria были разработаны другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение при определении устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфонамидам.

В настоящее время агар Мюллера—Хинтона используется как тестовая среда для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Среда предназначена для диффузии антимикробных препаратов, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель в соответствии с утверждённым стандартом CLSI.

Выбор агара Мюллера—Хинтона для определения чувствительности обусловлен следующими характеристиками:

1. Хорошая воспроизводимость результатов тестирования чувствительности от серии к серии.
2. Низкое содержание ингибиторов сульфонамида, триметоприма и тетрациклина.
3. Поддержка роста большинства неприхотливых патогенных бактерий.
4. Наличие значительного объёма данных и практического опыта по оценке рабочих характеристик среды.

Kirby—Bauer рекомендовали эту среду для проведения тестов на чувствительность к антибиотикам с использованием одного диска с высокой концентрацией антимикробного препарата. Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности принял агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов.

Агар Мюллера—Хинтона с 5 % бараньей кровью и агар Мюллера—Хинтона с гемоглобином рекомендованы для определения чувствительности к антимикробным препаратам Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae.

Настой HM B и ациказа обеспечивают среду азотсодержащими соединениями, углеродом, серой и другими необходимыми питательными веществами. Крахмал действует как защитный коллоид, связывающий токсичные вещества, присутствующие в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина, что определено по значениям минимальной ингибирующей концентрации для Enterococcus faecalis при использовании сульфаметоксазола и триметоприма (SXT).

Процедура Kirby—Bauer основана на диффузии антимикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, в агар. В методе используется диск с одной концентрацией антимикробного препарата; измеренные диаметры зон подавления роста сопоставляются со значениями минимальной ингибирующей концентрации (MIC).

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Агар Мюллера—Хинтона поставляется как готовая к применению твёрдая среда во флаконе из стекла.
2. Среда предварительно стерилизована и не требует дополнительной стерилизации.
3. Перед плавлением слегка ослабьте крышку флакона.
4. Расплавьте среду на предварительно нагретой водяной бане или другим подходящим способом.
5. После полного расплавления среды разлейте её в пробирки для формирования столбиков или скошенной поверхности либо в чашки в соответствии с целью анализа.
6. Оставьте среду до затвердевания.
7. При использовании чашки выполните штриховой посев, инокуляцию или поверхностное распределение тестовой посевной дозы асептическим способом.
8. Стандартизованную суспензию исследуемого микроорганизма распределяют тампоном по всей поверхности среды.
9. Бумажные диски, пропитанные определёнными количествами антимикробных препаратов, помещают на поверхность среды.
10. Чашки инкубируют, после чего измеряют зоны подавления роста вокруг каждого диска.
11. Чувствительность определяют сравнением полученных результатов со стандартами CLSI.

Посевная доза: 50–100 КОЕ.

Факторы, влияющие на результат

На результаты диско-диффузионного теста чувствительности влияют:

• толщина слоя агара;
• активность диска;
• концентрация инокулята;
• pH среды;
• продукция β-лактамаз исследуемыми микроорганизмами.

Условия обращения с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Среда рекомендована только для тестирования чувствительности чистых культур.
2. Плотность инокулята может влиять на размер зоны подавления роста: слишком плотный инокулят может привести к уменьшению зон, а слишком низкая посевная доза — к их увеличению.
3. Требовательные микроорганизмы могут не расти на этой среде и нуждаться в добавлении крови.
4. Требовательные анаэробные микроорганизмы могут не расти на этой среде.
5. Поскольку определение чувствительности проводится с использованием антибиотических дисков, необходимо соблюдать надлежащие условия хранения дисков; нарушение хранения может повлиять на их активность.
6. В отдельных случаях результаты определения чувствительности in vitro могут не совпадать с результатами, наблюдаемыми in vivo.

Рабочие характеристики и оценка

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованном температурном диапазоне.

Контроль качества

Внешний вид: стерильный стеклянный флакон с слегка опалесцирующим агаром Мюллера—Хинтона.

Цвет среды: светло-янтарный.

Количество среды: 100 мл во флаконе из стекла.

pH: 7,20–7,40.

Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска.

Культуральные характеристики: тесты на чувствительность к антибиотикам проводят в соответствии с действующей ISO/TS 16782; полученные результаты должны соответствовать установленным пределам приемлемости. Рабочие характеристики среды проверяют в соответствии с руководствами CLSI и EUCAST.

Тест на чувствительность к антибиотикам

Диски тестировали со стандартными штаммами ATCC. Диаметры зон подавления роста измеряли после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч в соответствии с последним протоколом CLSI M6 и действующим стандартом CLSI M100.

Содержание тимина и тимидина

Зоны подавления роста для указанных дисков характеризуют содержание тимина и тимидина в среде.

Содержание двухвалентных катионов

Зоны подавления роста для указанных дисков характеризуют содержание двухвалентных катионов в среде.