HiMedia SM078-5X100ML Железный агар Клиглера (5×100 мл)

Дифференциальная питательная агаровая среда HiMedia SM078-5X100ML Железный агар Клиглера (5×100 мл) — готовая к применению стерильная среда во флаконе для идентификации энтеробактерий по ферментации декстрозы, лактозы и образованию H₂S. HiMedia SM078-5X100ML применяют для анализа выделенных микроорганизмов из клинических, пищевых, молочных и водных образцов; результаты учитывают через 18–24 ч, используя чистые культуры и прямую инокуляционную петлю.

Назначение

Железный агар Клиглера предназначен для дифференциальной идентификации грамотрицательных кишечных палочек из клинических и не клинических образцов по ферментации декстрозы, лактозы и образованию сероводорода H₂S.

Тип образца: выделенные микроорганизмы из клинических, пищевых, молочных и водных образцов.

Среда используется для идентификации брюшнотифозных, дизентерийных и родственных им бацилл, а также для дифференциации ферментирующих и неферментирующих лактозу энтеробактерий.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

HM Peptone B эквивалентен мясному экстракту.

Принцип действия и интерпретация

Железный агар Клиглера представляет собой комбинацию среды с ацетатом свинца, описанной Клиглером, и двухсахарного агара Рассела. Феноловый красный используется в качестве индикатора pH вместо ранее применявшегося индикатора Андраде.

Ферментация декстрозы приводит к образованию кислоты, из-за чего индикатор меняет цвет с красного на жёлтый. Содержание декстрозы в среде небольшое, поэтому образование кислоты ограничено; на поверхности среды происходит повторное окисление индикатора, и её поверхность снова становится красной.

При ферментации лактозы образуется большое количество кислоты, препятствующее повторному окислению индикатора, поэтому вся среда окрашивается в жёлтый цвет.

Лактоза, глюкоза (декстроза), пептон, HM Peptone B и дрожжевой экстракт обеспечивают дифференциацию видов кишечных бацилл. Феноловый красный изменяет цвет в ответ на образование кислоты при ферментации сахаров.

Комбинация сульфата железа и тиосульфата натрия позволяет выявлять образование сероводорода H₂S. Образование H₂S определяется по чёрному окрашиванию столбика среды или по чёрному кольцу в верхней части столбика.

Не ферментирующие лактозу микроорганизмы, например Salmonella и Shigella, первоначально вызывают пожелтение скошенной части из-за кислоты, образовавшейся при ферментации небольшого количества глюкозы (декстрозы). После исчерпания глюкозы в аэробной среде скошенной части реакция становится щелочной: скошенная часть окрашивается в красный цвет вследствие окисления образовавшихся кислот. В анаэробной среде столбика обратного изменения реакции не происходит, поэтому столбик остаётся кислым и жёлтым.

Ферментирующие лактозу микроорганизмы вызывают жёлтое окрашивание скошенной части и столбика. Большое количество образующейся кислоты поддерживает кислый pH также в аэробных условиях.

Оригинальный цвет среды в пробирке указывает на отсутствие ферментации глюкозы (декстрозы) и лактозы.

Газообразование, или аэрогенная реакция, определяется по отдельным пузырькам газа, расслоению среды или её смещению вследствие образования трещин в столбике.

Для идентификации на железный агар Клиглера инокулируют чистые культуры предполагаемых микроорганизмов, выделенные на плотных средах, включая агар МакКонки (M081), бисмут-сульфитный агар (M027), дезоксихолат-цитратный агар (M065), SS-агар (M108) и другие.

Методика применения

Железный агар Клиглера представляет собой готовую к применению плотную среду в стеклянном флаконе. Среда предварительно стерилизована и не требует дополнительной стерилизации перед использованием.

1. Перед плавлением слегка ослабьте крышку флакона.
2. Расплавьте среду в предварительно нагретой водяной бане или другим подходящим способом.
3. После полного расплавления среды разлейте её по пробиркам, формируя столбики, скошенную поверхность или столбики со скошенной поверхностью, либо разлейте в чашки в соответствии с целью анализа.
4. Дайте среде застыть.
5. При использовании чашки асептически нанесите исследуемый инокулят штриховым посевом, инокуляцией или поверхностным распределением. Посевная доза: 50–100 КОЕ.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для клинических образцов используйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно действующим руководствам.

Для водных образцов используйте соответствующие методы отбора и обработки согласно руководствам и местным нормативным требованиям.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Результаты следует учитывать через 18–24 ч. Более поздняя оценка может привести к ошибочным результатам.
2. Для инокуляции следует использовать прямую проволочную петлю.
3. Для исключения ошибочных результатов необходимо использовать чистые изоляты.
4. Для подтверждения необходима дальнейшая биохимическая и серологическая идентификация.

Предупреждения и меры предосторожности

• Среда предназначена для диагностического применения вне организма и только для профессионального использования.
• Перед открытием контейнера изучите маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.
• Материал, контактировавший с клиническими образцами, необходимо обеззараживать и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методами.

Контроль качества

Внешний вид: стерильный стеклянный флакон с прозрачным или слегка опалесцирующим железным агаром Клиглера.

Цвет среды: красный.

Количество среды: 100 мл среды в стеклянном флаконе.

pH: 7,20–7,60.

Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска.

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при применении согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованном температурном диапазоне.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.