Питательная микробиологическая среда HiMedia SM021-5X100ML Трехсахарный железный агар (5×100 мл) — предварительно стерилизованная готовая к применению твёрдая среда в стеклянных флаконах. Среда предназначена для идентификации грамотрицательных кишечных бактерий по ферментации декстрозы, лактозы и сахарозы, а также образованию сероводорода (H₂S).

Назначение

Трёхсахарный железный агар (TSI) применяют для идентификации грамотрицательных кишечных бактерий на основании ферментации декстрозы, лактозы и сахарозы и образования сероводорода (H₂S).

Тип образца: выделенный микроорганизм из воды, пищевой продукции или клинического образца.

Состав

Состав, г/л:

HM Peptone B эквивалентен мясному экстракту.

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам рабочих характеристик.

Конечный pH при 25 °C: 7,4 ± 0,2.

Форма выпуска и технические характеристики

• Форма среды: готовая к применению твёрдая питательная среда.
• Стерилизация: среда предварительно стерилизована; дополнительная стерилизация не требуется.
• Первичная упаковка: стеклянный флакон.
• Объём среды во флаконе: 100 мл.
• Комплектность упаковки: 5 флаконов по 100 мл.
• Внешний вид: стерильный трёхсахарный железный агар в стеклянном флаконе.
• Цвет среды: розовато-красный.
• Реакция среды: 7,20–7,60.
• Испытание на стерильность: соответствует критериям выпуска.

Принцип действия и интерпретация

Трёхсахарный железный агар первоначально предложен Sulkin и Willett и модифицирован Hajna для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae. Среда соответствует рекомендациям APHA при исследовании мяса и пищевых продуктов, исследовании молока и молочных продуктов, проведении микробиологического предельного испытания для подтверждения присутствия Salmonellae, а также идентификации грамотрицательных бацилл.

Пептон, триптон, дрожжевой экстракт и HM Peptone B обеспечивают среду азотистыми соединениями, серой, микроэлементами и витаминами группы B. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие. Лактоза, сахароза и декстроза являются сбраживаемыми углеводами. Тиосульфат натрия и ионы железа образуют индикаторную систему для определения H₂S. Феноловый красный служит индикатором pH.

Микроорганизмы, ферментирующие глюкозу, образуют различные кислоты, изменяя цвет среды с красного на жёлтый. Количество образующихся кислот выше в столбике среды, где происходит ферментация, чем в скошенной части, где преобладает дыхание. Растущие бактерии также образуют щелочные продукты в результате окислительного декарбоксилирования пептона. Эти щелочные продукты нейтрализуют большое количество кислоты в столбике среды.

Щелочная скошенная часть красного цвета и кислотный жёлтый столбик после инкубации указывают, что микроорганизм ферментирует глюкозу, но не способен ферментировать лактозу и/или сахарозу. Бактерии, ферментирующие лактозу или сахарозу либо оба углевода одновременно, дополнительно к глюкозе образуют большое количество кислоты. В этой области pH не возвращается к исходному значению, поэтому формируются кислотные скошенная часть и столбик. Если микроорганизм ферментирует все три сахара — глюкозу, лактозу и сахарозу, — также наблюдаются кислотные скошенная часть и столбик.

Образование газа определяют по появлению трещин или пузырьков в среде, возникающих при выходе накопившегося газа. Тиосульфат восстанавливается несколькими видами бактерий до сероводорода. H₂S реагирует с ионами железа в составе солей железа с образованием нерастворимого чёрного осадка сульфида железа. Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде, поэтому почернение обычно наблюдается в столбике среды.

Трёхсахарный железный агар следует использовать параллельно с мочевинным агаром/бульоном для дифференциации видов Salmonella и Proteus. Коды совместимых сред: M112/M111.

Сводная интерпретация реакций

• Щелочная скошенная часть / только кислотный столбик: ферментируется глюкоза.
• Кислотные скошенная часть и столбик: ферментируются глюкоза и сахароза, либо глюкоза и лактоза, либо все три сахара — глюкоза, лактоза и сахароза.
• Наличие пузырьков или трещин: образование газа.
• Наличие чёрного осадка: образование газа H₂S.

Методика подготовки и применения

1. Используйте среду в стеклянном флаконе непосредственно после получения; среда готова к применению и предварительно стерилизована.
2. Перед плавлением слегка ослабьте крышку флакона.
3. Расплавьте среду на предварительно нагретой водяной бане или другим подходящим способом.
4. После полного расплавления среды разлейте её во флаконы или пробирки с формированием столбика и скошенной части либо в чашки в зависимости от требуемой постановки анализа.
5. Дайте среде затвердеть.
6. При использовании чашки Петри асептически нанесите исследуемый инокулят штриховым посевом, инокуляцией или поверхностным распределением.
7. Используйте посевную дозу 50–100 КОЕ.
8. Инкубируйте посевы при 35–37 °C в течение 18–24 ч.
9. Оцените рост, реакцию скошенной части и столбика, газообразование и образование H₂S по результатам инкубации.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.