HiMedia MV919-500G Основа ферментационной HiVeg среды для Clostridium

Основа ферментационной среды HiVeg для Clostridium HiMedia MV919-500G предназначена для изучения реакций ферментации Clostridium perfringens с добавлением углеводов. Среда разработана на основе растительных пептонов, что исключает риски заражения BSE/TSE (губчатой энцефалопатией); вес упаковки составляет 500 г.

Принцип измерения

Среда используется для дифференциации C. perfringens от других видов клостридий на основании способности вырабатывать кислоту при ферментации специфических углеводов. Гидролизат HiVeg® и специальный пептон HiVeg® обеспечивают необходимые питательные вещества для роста, а тиогликолят натрия создает условия с низким содержанием кислорода, необходимые для развития анаэробных организмов.

Область применения

Среда рекомендуется для анализа проб пищевых продуктов. Применяется для идентификации C. perfringens, которые часто являются контаминантами почвы и причиной пищевых отравлений, а также вызывают порчу консервированных и охлажденных продуктов.

Методика проведения анализа

Подготовка образца

1. Внесите около 2 г образца продукта в 15–20 мл бульона CL HiVeg® (MV606).
2. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 20–24 ч.
3. Высейте культуру на агар Tryptose Sulphite Cycloserine (T.S.C.) с эмульсией яичного желтка (FD045) для получения предполагаемых колоний Clostridium perfringens.
4. Выберите репрезентативные черные колонии и инокулируйте их в жидкую среду Thioglycollate HiVeg® (MV009).
5. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 18–24 ч.
6. Проведите окраску по Грамму и изолируйте на агаре Perfringens HiVeg® (MV837), инкубируя в анаэробных условиях при 35–37 °C в течение 18–24 ч.
7. Полученные культуры из жидкой среды (MV009) используют для биохимической идентификации, включая ферментацию углеводов.

Приготовление и использование среды

1. Растворите 22,25 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Разлейте по 9 мл в пробирки, содержащие перевернутые трубки Дюрхама.
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 мин.
5. Перед использованием прогрейте в кипящей воде или потоке пара в течение 10 мин для удаления растворенного кислорода.
6. Добавьте в отдельные пробирки по 1 мл стерильного 1 % раствора салицина и раффинозы соответственно.

Интерпретация результатов

Для проверки продукции кислоты перенесите 1 мл культуры из среды (содержащей салицин или раффинозу) в пробирку и добавьте 2 капли 0,04 % раствора бромтимолового синего.

• Появление жёлтого цвета указывает на продукцию кислоты.
• Салицин быстро ферментируется клостридиями, отличными от C. perfringens.
• C. perfringens вырабатывает кислоту из раффинозы в течение 3 суток, что не характерно для других видов.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Общие параметры

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободный порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Желирование: полутвердое, сопоставимо с 0,2 % агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-янтарный, прозрачный раствор без осадка.
• Реакция 2,22 % (масса/объем) водного раствора при 25 °C: pH 7,4 $\pm$ 0,2.
• Диапазон pH: 7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются в анаэробных условиях с добавлением 1 % растворов салицина и раффинозы в две отдельные пробирки после инкубации при 35–37 °C в течение 24–72 ч. Проверка продукции кислоты осуществляется добавлением 0,04 % бромтимолового синего.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 15–25 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Меры предосторожности и утилизация

• Требуется использование защитных перчаток, одежды и средств защиты глаз/лица.
• Работа с образцами и культурами должна проводиться в соответствии с надлежащей микробиологической лабораторной практикой.
• Отработанные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве перед утилизацией. Утилизация осуществляется путем автоклавирования и/или инсинерации согласно установленным лабораторным процедурам для инфекционных материалов.

Ограничения

Для окончательной идентификации микроорганизма необходимо проведение дополнительных биохимических и серологических тестов.