HiMedia MV919-500G Основа ферментационной HiVeg среды для Clostridium

Питательная среда HiMedia MV919-500G — порошковая основа ферментационной среды HiVeg® для Clostridium perfringens с конечным pH 7,4 ± 0,2. Основа предназначена для изучения ферментации углеводов Clostridium perfringens и дифференциации от других видов Clostridium по образованию кислоты из углеводов.

Назначение

Основа ферментационной HiVeg® среды для изучения реакции ферментации Clostridium perfringens с добавлением углеводов. Применяется при исследовании пищевых образцов и идентификации C. perfringens среди других видов Clostridium.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с установленными рабочими параметрами.

Принцип действия и интерпретация результатов

Загрязнение пищевых продуктов клостридиями в значительной степени происходит из почвы и обычно связано с пищевыми отравлениями, вызываемыми Clostridium perfringens. Спорообразующие клетки вырабатывают термолабильный энтеротоксин, вызывающий основные симптомы диареи при отравлении C. perfringens. Энтеротоксин не образуется в пищевых продуктах заранее, однако продукты, в которых создаются благоприятные условия для спорообразования, могут содержать энтеротоксин.

Clostridium часто загрязняют пищевые продукты и могут быть причиной порчи консервов, охлаждённых продуктов и других пищевых изделий.

Основа ферментационной среды для C. perfringens разработана Spray и рекомендована APHA для определения реакции ферментации C. perfringens. Среда используется для идентификации C. perfringens среди других видов Clostridium. В ферментационной среде HiVeg® вместо пептонов животного происхождения применяются растительные пептоны, благодаря чему среда не содержит рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (TSE).

Гидролизат HiVeg® и специальный пептон HiVeg® обеспечивают необходимые питательные вещества для роста. Тиогликолят натрия создаёт пониженное содержание кислорода, необходимое для роста анаэробных микроорганизмов.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 22,25 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте по 9 мл в пробирки, содержащие перевёрнутые трубки Дюрхема.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм и температуре 121 °C в течение 15 мин. Давление соответствует примерно 0,10 МПа.
5. Перед использованием прогрейте среду в кипящей воде или в свободно текущем паре в течение 10 мин для удаления растворённого кислорода.
6. Добавьте в отдельные пробирки по 1 мл 1%-го стерильного раствора салицина и 1%-го стерильного раствора раффинозы.

Тип образца

Пищевые образцы.

Отбор и подготовка образца

1. Внесите около 2 г пищевого образца в 15–20 мл бульона CL HiVeg® (MV606).
2. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 20–24 ч.
3. Выполните посев штрихом на основу триптозо-сульфит-циклосеринового агара (T.S.C.) (MV837), содержащую эмульсию яичного желтка (FD045), для получения предположительно содержащих Clostridium perfringens культур.
4. Отберите характерные чёрные колонии и внесите их в жидкую тиогликолевую среду HiVeg® (MV009).
5. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 18–24 ч.
6. Выполните окрашивание по Граму и выделите культуру на основу агара HiVeg® для Perfringens (MV837).
7. Инкубируйте в анаэробных условиях при 35–37 °C в течение 18–24 ч для получения изолированных колоний.
8. Пробирки с жидкой тиогликолевой средой (MV009) можно дополнительно использовать для подтверждения C. perfringens с помощью биохимической идентификации, включая ферментацию углеводов.

• C. perfringens* дифференцируют от других клостридий по образованию кислоты из углеводов. Для определения кислотообразования перенесите 1 мл культуры из ферментационной основы среды для C. perfringens, содержащей салицин или раффинозу, в пробирку и добавьте 2 капли 0,04%-го бромтимолового синего. Жёлтая окраска указывает на образование кислоты.

Салицин быстро ферментируется клостридиями, отличными от C. perfringens. C. perfringens образует кислоту из раффинозы в течение 3 суток; другие виды этого не показывают.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: MV919-500G
• Назначение изделия: основа ферментационной среды
• Масса: 500 г
• Происхождение пептонов: растительное, без компонентов животного происхождения
• Тип продукта: HiVeg™
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: HDPE — полиэтилен высокой плотности
• Конечный pH при 25 °C: 7,4 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,20–7,60
• Температура хранения продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 15–25 °C

Приготовление и условия проведения анализа

• Растворитель: очищенная или дистиллированная вода
• Навеска: 22,25 г на 1000 мл воды
• Объём среды в пробирке: 9 мл
• Трубка для выявления газа: перевёрнутая трубка Дюрхема
• Стерилизация: автоклавирование при 121 °C в течение 15 мин при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, примерно 0,10 МПа
• Удаление растворённого кислорода перед использованием: нагревание в кипящей воде или в свободно текущем паре в течение 10 мин
• Добавляемые углеводы: по 1 мл 1%-го стерильного раствора салицина и 1%-го стерильного раствора раффинозы в отдельные пробирки
• Условия культивирования для оценки культуральных характеристик: анаэробные условия, 35–37 °C, 24–72 ч
• Реактив для определения кислотообразования: 0,04%-й бромтимоловый синий, 2 капли на 1 мл культуры
• Признак кислотообразования: жёлтая окраска

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Желирование

Полутвёрдая среда, сопоставимая с 0,2%-м агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Раствор светло-янтарного цвета, прозрачный, без осадка.

Реакция

Реакция 2,22%-го водного раствора по массе/объёму при 25 °C: pH 7,4 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают в анаэробных условиях после добавления 1%-х растворов салицина и раффинозы в две отдельные пробирки со средой и инкубации при 35–37 °C в течение 24–72 ч. Кислотообразование определяют добавлением 0,04%-го бромтимолового синего.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед вскрытием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Указания по безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

Для окончательной идентификации необходимо провести дополнительные биохимические и серологические исследования.

Ожидаемые рабочие характеристики

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Хранение и срок годности

Храните продукт при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере. Приготовленную среду храните при температуре 15–25 °C. Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка. Неправильное хранение может привести к образованию комков. Храните в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После использования плотно закрывайте контейнер. Рабоч