HiMedia M144A-500G Основа колумбийского кровяного агара с 1% агара

Основа колумбийского кровяного агара с 1% агара HiMedia M144A-500G используется для изоляции и культивирования требовательных бактерий при добавлении крови. Питательная среда обеспечивает интенсивный рост микроорганизмов и четкую визуализацию гемолитических реакций.

Принцип измерения и интерпретация

Основа колумбийского кровяного агара представляет собой универсальную питательную среду, разработанную для последующего обогащения стерильной кровью. В отличие от традиционных основ, использующих либо гидролизат казеина (для быстрого роста крупных колоний), либо мясной настой (для четких гемолитических реакций), данная основа сочетает оба компонента, что улучшает общие характеристики среды.

Специальный пептон поддерживает быстрый и обильный рост как требовательных, так и нетребовательных организмов, способствует формированию типичной морфологии колоний, усилению пигментации и более четкому определению гемолиза. Кукурузный крахмал служит источником энергии и нейтрализует токсичные метаболиты.

При добавлении крови овей обеспечивается детекция гемолиза и поступление гема (X-фактор), необходимого для многих бактерий. Однако среда не содержит V-фактор (никотинамидадениндинуклеотид), поэтому Haemophilus influenzae, требующий обоих факторов (X и V), на ней не растет.

Особенности интерпретации:

• Из-за относительно высокого содержания углеводов бета-гемолитические стрептококки могут проявлять зеленоватую реакцию гемолиза, которую можно ошибочно принять за альфа-гемолиз. Требуется проведение подтверждающих тестов всех колоний.
• При добавлении стерильной сыворотки среда эффективно используется для теста на вирулентность Corynebacterium diphtheriae (линии преципитации токсина-антитоксина становятся видимыми через 48 часов).

Методика приготовления и использования

Приготовление базовой среды

1. Суспендировать 39,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревать до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C перед добавлением термолабильных компонентов.

Варианты модификации среды

• Кровяной агар: добавить 5% (об/об) стерильной дефибринированной крови овцы в охлажденную стерильную основу.
• Шоколадный агар: добавить 10% (об/об) стерильной дефибринированной крови овцы в охлажденную стерильную основу. Нагревать при 80 °C в течение 10 минут при постоянном перемешивании.
• Селективные среды: для получения селективных сред в стерильную основу добавляются различные антимикробные агенты.

Специфические добавки для изоляции микроорганизмов

Добавки вводятся в 500 мл стерильной расплавленной основы в виде одного регидратированного флакона:

• Для видов Brucella: селективная добавка NPBCVN (FD005).
• Для видов Campylobacter: селективная добавка Blaser-Wang (FD006), Butzler (FD007), Skirrow (FD008), VTCA (FD090) или Butzler VI (FD106) совместно с минеральной добавкой для роста (FD009).
• Для видов Gardnerella: селективная добавка GNA (FD056).
• Для кокков: селективная добавка NC (FD030), NNP (FD031) или CO (FD119).

Условия культивирования

• Общие условия: инкубация при 35–37 °C.
• Требования к $\text{CO}_2$: многим патогенам требуется атмосфера с содержанием $\text{CO}_2$ примерно 3–10 %.
• Специфика:
  • Культуры Brucella высокоинфекционны; инкубировать в атмосфере 5–10 % $\text{CO}_2$.
  • Виды Campylobacter лучше всего растут при 42 °C в микроаэрофильной атмосфере.
  • Пластины с добавками для Gardnerella инкубируют при 35 °C в течение 48 часов в атмосфере 7 % $\text{CO}_2$.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Общие параметры

• Конечный pH (при 25 °C): 7,3 $\pm$ 0,2
• Диапазон pH: 7,10–7,50
• Внешний вид: однородный свободнотекучий порошок от кремового до желтого цвета
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,0 % агаром
• Цвет и прозрачность основы: светло-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель
• Цвет после добавления 5 % крови: вишнево-красный непрозрачный гель

Дополнительные спецификации

Область применения

• Клинические образцы: респираторные экссудаты, поражения кожи или ран, фекалии и др.
• Пищевые образцы: контроль качества пищевых продуктов.

Культуральные характеристики

Результаты получены при добавлении 5 % (об/об) дефибринированной крови после инкубации при 35–37 °C в течение 40–48 ч.

Ограничения и предостережения

1. Бета-гемолитические стрептококки могут давать ложноположительную реакцию альфа-гемолиза (зеленоватый оттенок).
2. Рост отдельных организмов может варьироваться в зависимости от их индивидуальных потребностей.
3. Для полной идентификации микроорганизмов требуются дополнительные биохимические и серологические тесты.
4. Среда предназначена только для профессионального использования в целях диагностики in vitro.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C. Из-за гигроскопичности продукта необходимо плотно закрывать бутылку для предотвращения комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Утилизация: загрязненные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией.