HiMedia M144A-500G Основа колумбийского кровяного агара с 1% агара

Порошковая основа питательной среды HiMedia M144A-500G Основа колумбийского кровяного агара с 1% агара с содержанием агара 10,000 г/л (1 %). Основа предназначена для приготовления кровяного и селективных агаров для выделения и культивирования требовательных бактерий, но не поддерживает рост Haemophilus influenzae, которому необходимы факторы X и V.

Назначение

Основа колумбийского кровяного агара применяется с кровью для выделения и культивирования требовательных бактерий. Используется для приготовления:

• кровяного агара;
• шоколадного агара;
• селективных сред с добавлением различных противомикробных препаратов;
• селективных сред для Brucella, Campylobacter, Gardnerella и кокков;
• среды с добавлением стерильной сыворотки для определения вирулентности Corynebacterium diphtheriae.

Типы образцов:

• клинические образцы: респираторные экссудаты, материал из поражений кожи или ран, фекалии и другие;
• пищевые образцы.

Состав

Состав среды:

• Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2
• Концентрация среды для приготовления: 39,0 г на 1000 мл воды
• Происхождение компонентов: животное

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация

Колумбийская кровяная агаровая основа представляет собой питательную агаровую основу общего назначения, разработанную Ellner и соавторами в 1966 году и дополнительно обогащаемую стерильной кровью.

Традиционные основы кровяного агара обычно содержат либо гидролизат казеина, обеспечивающий быстрое формирование крупных колоний, либо мясной настой, позволяющий получать выраженные гемолитические реакции. Колумбийская агаровая основа сочетает оба компонента. Специальный пептон поддерживает быстрый и обильный рост требовательных и нетребовательных микроорганизмов, способствует формированию типичной морфологии колоний, улучшает образование пигмента и обеспечивает более чёткие гемолитические реакции.

Кукурузный крахмал служит источником энергии и нейтрализует токсичные метаболиты. Овечья кровь позволяет выявлять гемолиз и обеспечивает гем, или фактор X, необходимый для роста многих бактерий. Овечья кровь не содержит фактор V — никотинамидадениндинуклеотид; поэтому Haemophilus influenzae, которому необходимы одновременно факторы X и V, на этой среде не растёт.

Из-за относительно высокого содержания углеводов β-гемолитические стрептококки могут давать зеленоватую гемолитическую реакцию, которую можно ошибочно принять за α-гемолиз. Для всех колоний необходимо проводить подтверждающие тесты.

Питательный агар с добавлением переваренной овечьей крови способен поддерживать рост H. influenzae. Добавление бацитрацина делает обогащённую колумбийскую агаровую среду селективной для выделения видов Haemophilus из клинических образцов, особенно из образцов верхних дыхательных путей. При этом для роста Haemophilus influenzae требуется наличие как фактора X, так и фактора V, а данная основа сама по себе фактор V не содержит.

Колумбийская агаровая основа со стерильной сывороткой используется как эффективная среда для определения вирулентности Corynebacterium diphtheriae. После выполнения установленной методики для C. diphtheriae линии преципитации токсин–антитоксин становятся отчётливо видимыми через 48 ч.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 39,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите стерильную основу до 45–50 °C перед добавлением термочувствительных компонентов.

Приготовление кровяного агара

Добавьте 5 % об./об. стерильной дефибринированной овечьей крови к стерильной охлаждённой основе.

Приготовление шоколадного агара

1. Добавьте 10 % об./об. стерильной дефибринированной овечьей крови к стерильной охлаждённой основе.
2. Нагревайте до 80 °C в течение 10 мин при постоянном перемешивании.

Селективную среду можно получить добавлением различных противомикробных препаратов к стерильной основе.

Селективная среда для Brucella

Добавьте регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки NPBCVN (FD005) к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Селективная среда для Campylobacter

К 500 мл стерильной расплавленной основы добавьте:

• регидратированное содержимое одного флакона одной из селективных добавок:
  • Blaser–Wang (Blaser-Wang) (FD006);
  • Butzler (Butzler) (FD007);
  • Skirrow (FD008);
  • VTCA (FD090);
  • Butzler VI (FD106);
• регидратированное содержимое одного флакона минеральной ростовой добавки (FD009).

Селективная среда для Gardnerella

Добавьте регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки GNA (FD056) к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Селективные среды для кокков

Добавьте регидратированное содержимое одного флакона одной из селективных добавок:

• NC (FD030);
• NNP (FD031);
• CO (FD119).

Объём стерильной расплавленной основы: 500 мл.

Условия инкубации

Многие патогенные микроорганизмы требуют углекислого газа; поэтому чашки можно инкубировать в атмосфере, содержащей приблизительно 3–10 % CO₂.

Специальные условия:

• культуры Brucella: инкубировать в атмосфере с 5–10 % CO₂; культуры высокоинфекционны и требуют осторожного обращения;
• виды Campylobacter: оптимально выращивать при 42 °C в микроаэрофильной атмосфере;
• чашки с добавками для Gardnerella: инкубировать при 35 °C в течение 48 ч в атмосфере с 7 % CO₂.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для пищевых образцов применяйте соответствующие установленным руководствам методы обращения с образцами.

Для клинических образцов применяйте соответствующие установленным руководствам методы обращения с образцами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный, свободно сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с гелем 1,0%-ного агара.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды:
  • базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета;
  • после добавления 5 % об./об. стерильной дефибринированной крови: в чашках Петри образуется непрозрачный гель вишнёво-красного цвета.
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 3,9 % м/об. при 25 °C.
• pH по реакции: 7,3 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определены после добавления 5 % об./об. дефибринированной крови и инкубации при 35–37 °C в течение 40–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ограничения применения

1. Из-за относительно высокого содержания углеводов β-гемолитические стрептококки могут давать зеленоватую гемолитическую реакцию, которую можно ошибочно принять за α-гемолиз.
2. Потребности отдельных микроорганизмов в условиях роста различаются, поэтому на среде могут наблюдаться вариабельные схемы роста.
3. Каждая серия среды протестирована на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). Для любого конкретного микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, рекомендуется проводить валидацию среды с учётом специфических требований пользователя.
4. Для полной идентификации требуются дополнительные биохимические и серологические исследования.

Требования безопасности

Среда предназначена для диагностики in vitro и профессионального применения.

При работе с продуктом и культурами:

• ознакомьтесь с маркировкой до вскрытия контейнера;
• используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица;
• соблюдайте правила надлежащей микроби