HiMedia MV911-500G Основа HiVeg агара для выделения C. botulinum

Основа HiVeg агара для выделения C. botulinum HiMedia MV911-500G — селективная питательная среда на растительной основе для изоляции возбудителя ботулизма из проб пищевых продуктов. Среда разработана с использованием компонентов HiVeg™, что исключает риски заражения BSE/TSE (губчатой энцефалопатией), и предназначена для работы в анаэробных условиях.

Принцип измерения и интерпретация

Среда сформулирована согласно рекомендациям APHA для селективного выделения Clostridium botulinum. Селективность обеспечивается добавлением антибиотиков широкого спектра (циклосерин, сульфаметоксазол и триметоприм), которые вводятся в виде отдельной добавки.

Для идентификации возбудителя используются следующие биохимические реакции:

• Лецитиназная активность: лецитиназа расщепляет лецитин яичного желтка, что приводит к образованию нерастворимого опалесцирующего (матового) осадка вокруг колоний.
• Липазная активность: липаза расщепляет свободные жиры яичного желтка, создавая на поверхности колоний радужную пленку (эффект «масляного пятна» на воде).

Роль компонентов:

• Гидролизат HiVeg® и экстракт дрожжей: источники аминокислот, азотистых веществ и витаминов группы B.
• Декстроза (глюкоза): ферментируемый углевод.
• Гидрофосфат натрия: буферная система.
• Сульфат магния: способствует споруляции микроорганизмов.
• Хлорид натрия: поддержание осмотического равновесия.

Методика проведения анализа

Подготовка образцов

Для инокуляции используют 1–2 г твердого или 1–2 мл жидкого пищевого продукта на 15 мл обогатительного бульона (например, среда с вареным мясом M149). После инкубации при 35 °C в течение 7 суток проверяют пробу на наличие помутнения, газообразования и переваривания мяса. Проводят окраску по Граму и окраску спор.

Процедура выделения

1. Алкогольная обработка: для изоляции C. botulinum обогатительный бульон смешивают с равным количеством стерильного этанола.
2. Посев: культуру после обработки этанолом или необработанные обогатительные культуры (а также образцы кала) высевают штрихом на основу HiVeg агара с добавлением эмульсии яичного желтка и добавки CBI.

Приготовление среды

1. Суспендировать 37,0 г порошка в 450 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавить 50 мл стерильной эмульсии яичного желтка (FD045) и содержимое 1 флакона добавки CBI (FD049).
6. Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Технические характеристики

Состав, г/л

Физико-химические свойства и контроль качества

• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до желтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 2,0 % агаром.
• Цвет и прозрачность:
  • Базовая среда: желтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
  • После добавления эмульсии яичного желтка: светло-желтый непрозрачный гель.
• Диапазон pH: 7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Характеристики определены в анаэробных условиях с добавлением эмульсии яичного желтка (FD045) и добавки CBI (FD049) после инкубации при 35–37 °C в течение 48 часов.

Дополнительные параметры

Область применения

Рекомендуется для селективного выделения Clostridium botulinum из проб пищевых продуктов. Применяется в микробиологических лабораториях при контроле безопасности продуктов питания.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом проветриваемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.
• Важное примечание: ботулический токсин термолабилен и нестабилен при щелочном pH, поэтому образцы и культуры следует хранить при температуре охлаждения и поддерживать слабокислый pH.

Ограничения и меры предосторожности

• Из-за вариативности питательных потребностей некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост.
• Работа с культурами должна проводиться в соответствии с правилами надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• Загрязненные материалы подлежат обязательному автоклавированию перед утилизацией.

Комплект поставки

• Основа HiVeg агара для выделения C. botulinum (порошок), 500 г.