HiMedia MV911-500G Основа HiVeg агара для выделения C. botulinum

Основа питательной среды HiMedia MV911-500G Основа HiVeg агара для выделения C. botulinum в порошкообразной форме, массой 500 г. Предназначена для селективного выделения Clostridium botulinum из пищевых образцов с применением эмульсии яичного желтка и селективной добавки CBI Supplement (FD049).

Назначение

Основа агара HiVeg предназначена для селективного выделения Clostridium botulinum из образцов пищевых продуктов. Питательная среда рассчитана на применение с эмульсией яичного желтка FD045 и добавкой CBI Supplement FD049.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров работы среды.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 37,0 г порошка в 450 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении около 0,103 МПа (15 фунтов давления) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 50 мл стерильной эмульсии яичного желтка Egg Yolk Emulsion (FD045) и восстановленное содержимое 1 флакона добавки CBI Supplement (FD049).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Clostridium botulinum — анаэробная спорообразующая бактерия, продуцирующая белковый нейротоксин ботулин. Употребление пищевых продуктов, контаминированных Clostridium botulinum, может привести к тяжёлому пищевому отравлению токсином.

Основа агара для выделения C. botulinum сформулирована в соответствии с рекомендациями APHA для селективного выделения C. botulinum из пищевых образцов. Селективная добавка FD049 содержит антибиотики широкого спектра действия: циклосерин, сульфаметоксазол и триметоприм, благодаря чему повышается селективность среды.

Эмульсия яичного желтка применяется для выявления лецитиназной, липазной и протеолитической активности:

• лецитиназа разрушает лецитин, содержащийся в яичном желтке, с образованием нерастворимого непрозрачного осадка в среде вокруг зоны роста;
• липаза расщепляет свободные жиры яичного желтка, вызывая появление на поверхности колоний радужного блеска, напоминающего масляную плёнку на воде;
• протеолитическая активность оценивается по разрушению белковых компонентов среды.

Основа агара HiVeg для выделения C. botulinum приготовлена с использованием пептонов растительного происхождения вместо пептонов животного происхождения, что исключает риски, связанные с BSE/TSE — губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями.

Гидролизат HiVeg® и дрожжевой экстракт обеспечивают среду аминокислотами, другими азотсодержащими веществами и витаминами группы B. Декстроза является сбраживаемым углеводом. Двузамещённый фосфат натрия выполняет буферную функцию. Сульфат магния способствует спорообразованию микроорганизмов. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды.

Ботулинический токсин термолабилен. Поэтому исследуемые образцы и культуры следует хранить при температурах холодильника. pH токсичного материала также следует поддерживать на слабокислом уровне, поскольку ботулинический токсин менее стабилен в щелочной среде.

Методика обогащения и выделения C. botulinum

1. Внесите 1–2 г твёрдого пищевого образца или 1–2 мл жидкого пищевого образца в каждые 15 мл обогатительного бульона.
2. Используйте в качестве обогатительного бульона среду с варёным мясом Cooked Meat Medium (M149).
3. Инкубируйте посевы при 35 °C в течение 7 суток.
4. После инкубации оцените наличие помутнения, образования газа и переваривания мясной ткани.
5. Выполните окраску по Граму и окраску спор.
6. Для выделения C. botulinum смешайте обогатительный бульон с равным объёмом стерильного этанола; обработка этанолом используется для селекции.
7. После обработки этанолом выполните штриховой посев культуры на основу агара для выделения C. botulinum (M911).
8. В качестве альтернативы необработанную обогатительную культуру или образец кала можно непосредственно засеять на основу агара для выделения C. botulinum.

Тип образца

Тип образца: пищевые продукты.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых продуктов и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно установленным руководствам.

После использования контаминированные материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Меры безопасности

• Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности, установленные действующими руководствами.
• Требования безопасности следует уточнять в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

Из-за вариаций питательных свойств некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Желирование

Желирование: плотный гель, сопоставимый с 2,0%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель жёлтого цвета.
• После добавления эмульсии яичного желтка: в чашках Петри образуется непрозрачный гель светло-жёлтого цвета.

Реакция среды

Реакция среды: 7,4 г в 90 мл дистиллированной воды при 25 °C.

pH: 7,4 ± 0,2.

Диапазон pH

Диапазон pH: 7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в анаэробных условиях с добавлением эмульсии яичного желтка FD045 и добавки CBI Supplement FD049 после инкубации при 35–37 °C в течение 48 ч.

Технические характеристики

Хранение и срок годности

Храните продукт при