HiMedia MV892-100G Модифицированный буферный HiVeg агар с активированным углем

Модифицированный буферный HiVeg агар с активированным углем HiMedia MV892-100G на основе растительных пептонов. Рекомендуется для изоляции и культивирования видов Legionella из различных образцов, включая пробы воды.

Принцип измерения

Виды Legionella представляют собой узкие грамотрицательные палочки, не образующие спор. Они не окисляют и не ферментируют углеводы в обычных средах и не растут на агаре с кровью овцы. Основным источником энергии для Legionella являются аминокислоты; L-цистин является абсолютным требованием для метаболизма и роста, а также способствует росту вместе с пирофосфатом железа.

Модифицированный буферный угольный агар аналогичен среде Buffered Charcoal Yeast Extract Agar, за исключением того, что дрожжевой экстракт заменён протеоз-пептоном. В данной модификации (HiVeg®) животные пептоны полностью заменены растительными для исключения рисков BSE/TSE (губчатой энцефалопатии коров и трансмиссивных губчатых энцефалопатий).

Основные компоненты среды:

• Активированный уголь: выполняет функцию детоксиканта.
• Растительный пептон HiVeg® № 3: богатый источник азота, углерода и витаминов.
• Буфер ACES: поддерживает оптимальный уровень pH для роста.
• L-цистин гидрохлорид, пирофосфат железа и $\alpha$-кетоглутарат: стимулируют рост видов Legionella.

Для селективной изоляции используются антибиотические добавки для подавления сопутствующих микроорганизмов:

• C3V (FD037): цефалотин, колистин, ванкомицин и циклогексимид.
• MWY (FD040): глицин, полимиксин B, анизомицин, ванкомицин, бромтимоловый синий и бромкрезоловый пурпурный.

Область применения

Среда предназначена для выделения и культивирования Legionella из клинического материала и проб окружающей среды (в частности, образцов воды).

Методика приготовления и использования

Приготовление среды

1. Суспендируйте 20,0 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx 0,1$ МПа / 15 фунтов) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте содержимое одной ампулы стерильного восстановителя Legi Growth Supplement w/o SS (Twin Pack) (FD041A).
6. Для придания селективности добавьте регидратированное содержимое одной ампулы MWY Selective Supplement (MWY, FD040).
7. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри при постоянном перемешивании для равномерного распределения частиц угля.
8. При необходимости в расплавленную среду можно добавить дополнительные селективные добавки Legionella (FD017, FD037 и FD038).

Сбор и обработка проб

Для проб воды следует использовать соответствующие методы сбора и обработки согласно местным стандартам и руководствам.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Общие параметры:

Контроль качества:

• Внешний вид: серый или черный гомогенный свободнотекущий порошок.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,7% агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: серо-черный опалесцирующий гель.
• Реакция 4% водного раствора при 25 °C: pH 6,9 $\pm$ 0,2.
• Диапазон pH: 6,70–7,10.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при добавлении добавок для Legionella (FD041A и FD040) после инкубации при 35–37 °C во влажной атмосфере.

* — соответствующие номера WDCM.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, защищенном от экстремальных температур и источников возгорания.

Меры предосторожности и ограничения

• Работа с культурами Legionella должна проводиться в защитном вытяжном шкафу с использованием халатов, масок и перчаток.
• Ограничение: для окончательного подтверждения вида требуется проведение дополнительных биохимических тестов.
• Утилизация: загрязненные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией.