HiMedia MV890A-500G Основа HiVeg среды для обогащения листерий

Микробиологическая питательная среда HiMedia MV890A-500G Основа HiVeg среды для обогащения листерий в виде порошка массой 500 г для селективного выделения и культивирования Listeria monocytogenes. Основа применяется в двухэтапной процедуре обогащения клинических образцов и пищевых продуктов; среда не является дифференциальной и требует дополнительных биохимических тестов для идентификации видов Listeria.

Назначение

Основа среды предназначена для приготовления жидкой среды селективного обогащения и выделения Listeria monocytogenes. Применяется для первичного и вторичного обогащения клинических образцов и пищевых продуктов, включая мясные продукты.

Продукт изготовлен на основе растительных пептонов и не содержит компонентов животного происхождения.

Состав

Состав на 1 л готовой среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Принцип действия и интерпретация

Листериоз вызывается Listeria monocytogenes — короткой грамположительной неспорообразующей палочкой. Бактерии распространены в почве и кишечнике многих животных, включая птиц, рыб, сельскохозяйственных животных, молочный скот и домашних питомцев. Передача человеку возможна через продукты, загрязнённые фекалиями, а также через продукты животного происхождения, контаминированные бактериями.

Основа среды для обогащения листерий HiVeg® предназначена для селективного культивирования и выделения L. monocytogenes из клинических образцов. Среда первоначально разработана Donnelly и Baigent, позднее модифицирована за счёт снижения концентрации налидиксовой кислоты в селективных добавках и последующего увеличения концентрации акрифлавина.

Модифицированная среда Университета Вермонта (UVM) представляет собой двухэтапную селективную систему обогащения, обеспечивающую более высокую частоту выделения L. monocytogenes из мясных продуктов в течение 3–4 суток. Бульон UVM рекомендуется использовать для первичного обогащения и восстановления термически повреждённых клеток Listeria.

Гидролизат HiVeg®, пептон HiVeg® № 3, экстракт HiVeg® и дрожжевой экстракт обеспечивают среду азотистыми и углеродистыми соединениями, аминокислотами с длинной углеродной цепью и другими необходимыми питательными веществами. Эскулин придаёт среде дифференциальные свойства. Налидиксовая кислота и гидрохлорид акрифлавина совместно с повышенной концентрацией фосфатов обеспечивают селективность среды для Listeria:

• налидиксовая кислота ингибирует грамотрицательные микроорганизмы;
• гидрохлорид акрифлавина ингибирует грамположительные микроорганизмы.

Разработанный двухэтапный метод селективного обогащения повышает частоту обнаружения L. monocytogenes в образцах и занимает 3–4 суток.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 27,17 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при температуре 121 °C в течение 15 мин и давлении примерно 0,103 МПа (15 фунтов давления по исходной методике).
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки UVM Selective Supplement I (FD136) для первичного обогащения или одного флакона UVM Selective Supplement II (FD137) для вторичного обогащения — в зависимости от задачи.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте готовую среду в стерильные пробирки или колбы необходимого объёма.

Методика проведения двухэтапного обогащения

Первичное выделение

1. Внесите 25 г или 25 мл образца в 225 мл основы среды для обогащения листерий с добавленной селективной добавкой UVM Selective Supplement I (FD136).
2. Инкубируйте в течение 24 ч.
3. После инкубации нанесите 0,2 мл полученной среды на чашку с агаром Listeria Selective HiVeg® (MV567).

Вторичное обогащение

1. Одновременно перенесите 0,1 мл бульонной культуры первичного обогащения в 10 мл свежей основы среды для обогащения листерий с добавленной селективной добавкой UVM Selective Supplement II (FD137).
2. После вторичного обогащения в течение 24 ч нанесите 0,2 мл полученной среды на чашку с агаром Listeria Selective HiVeg® (MV567).

Бульонные культуры Listeria представляют большую опасность при работе, чем колонии на агаровых чашках. При обращении с бульонными культурами необходимо соблюдать соответствующие меры предосторожности.

Тип образца

В документации производителя конкретные типы образцов не указаны.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до светло-коричневого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Раствор янтарного цвета, слегка опалесцирующий, с голубоватым оттенком.

Реакция

Реакция 5,43 % мас./об. водного раствора при 25 °C; pH: 7,4 ± 0,2.

Диапазон pH

7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч. Рост указан после добавления FD136 или FD137.

* Соответствующие номера WDCM.

Ограничения применения

Среда не является дифференциальной. Для идентификации и различения видов Listeria необходимо проведение дополнительных биохимических исследований.

Обращение с образцами и меры предосторожности

• Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности следует уточнять в соответствующих паспортах безопасности.
• После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Условия хранения и срок годности

• Условия хранения сухого