HiMedia MV890A-100G Основа HiVeg среды для обогащения листерий

Питательная среда HiMedia MV890A-100G Основа HiVeg среды для обогащения листерий — порошковая основа для селективного выделения и культивирования Listeria monocytogenes. Применяется для первичного и вторичного обогащения образцов, при этом среда не является дифференциальной и требует дополнительных биохимических тестов для идентификации видов Listeria.

Назначение

Основа HiVeg среды для обогащения листерий предназначена для селективного культивирования и выделения Listeria monocytogenes из клинических образцов и пищевых продуктов. UVM-бульон рекомендуется использовать для первичного обогащения термически повреждённых клеток Listeria.

Двухэтапный метод селективного обогащения позволяет повысить выявляемость L. monocytogenes; продолжительность процедуры составляет 3–4 дня.

Состав

Состав приведён для приготовления среды, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация

Листериоз вызывается короткой грамположительной неспорообразующей палочкой Listeria monocytogenes. Бактерии широко распространены в почве и кишечнике многих животных, включая птиц, рыб, сельскохозяйственных животных, молочный скот и домашних питомцев. Передача человеку происходит через продукты питания, загрязнённые фекалиями, а также через употребление продуктов животного происхождения, контаминированных бактериями.

Среда для обогащения листерий первоначально разработана Donnelly и Baigent. Позднее состав был модифицирован: концентрацию налидиксовой кислоты в селективных добавках уменьшили, а концентрацию акрифлавина впоследствии увеличили.

Модификация среды Университета Вермонта (UVM) предусматривает двухэтапное селективное обогащение и обеспечивает более высокую частоту выделения L. monocytogenes из мясных продуктов в течение 3–4 дней.

Растительные пептоны используются вместо пептонов животного происхождения, поэтому среда не связана с рисками BSE/TSE. Гидролизат HiVeg®, пептон HiVeg® № 3, экстракт HiVeg® и дрожжевой экстракт обеспечивают среду азотистыми и углеродсодержащими соединениями, аминокислотами с длинной цепью и другими необходимыми питательными веществами. Эскулин придаёт среде дифференциальные свойства.

Налидиксовая кислота и гидрохлорид акрифлавина совместно с повышенной концентрацией фосфатов обеспечивают селективность среды в отношении Listeria. Налидиксовая кислота ингибирует грамотрицательные микроорганизмы, а гидрохлорид акрифлавина — грамположительные микроорганизмы.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 27,17 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Для первичного обогащения асептически добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки UVM I (FD136).
6. Для вторичного обогащения асептически добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки UVM II (FD137) в соответствии с требуемой процедурой.
7. Тщательно перемешайте среду.
8. Разлейте приготовленную среду в стерильные пробирки или колбы.

Методика проведения двухэтапного обогащения

Первичное выделение

1. Внесите 25 г или 25 мл образца в 225 мл основы среды для обогащения листерий с добавленной селективной добавкой UVM I (FD136).
2. Инкубируйте в течение 24 ч.
3. После инкубации нанесите 0,2 мл полученной среды на чашку со селективным агаром HiVeg® для листерий (MV567).
4. Одновременно перенесите 0,1 мл бульона обогащения в 10 мл свежей основы среды для обогащения листерий с добавленной селективной добавкой UVM II (FD137).

Вторичное обогащение

1. Инкубируйте вторичную культуру в течение 24 ч.
2. После инкубации нанесите 0,2 мл вторичной культуры на чашку с селективным агаром HiVeg® для листерий (MV567).

Бульонные культуры Listeria опаснее колоний на агаризованных средах. При работе с бульонными культурами необходимо соблюдать соответствующие меры предосторожности.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: MV890A-100G
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Физическая форма: порошок
• Масса: 100 г
• Тип продукта: HiVeg™
• Происхождение компонентов: без компонентов животного происхождения, растительная основа
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE)
• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C
• Конечный pH: 7,4 ± 0,2 при 25 °C
• Диапазон pH: 7,20–7,60
• Концентрация водного раствора для контроля реакции: 5,43 % масс./об.
• Время инкубации для оценки культуральных характеристик: 24–48 ч
• Температура инкубации для оценки культуральных характеристик: 35–37 °C

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до светло-коричневого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Раствор янтарного цвета, слегка опалесцирующий, с голубоватым оттенком.

Реакция среды

Реакция 5,43%-ного водного раствора при 25 °C: pH 7,4 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч. В среду добавляют FD136 или FD137.

* Соответствующие номера WDCM.

Ограничения применения

Среда не является дифференциальной. Для идентификации видов Listeria необходимо проведение дополнительных биохимических исследований.

Работа с образцами и безопасность

• Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики.
• При работе с образцами применяйте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.
• Загрязнённые материалы перед утилизацией необходимо стерилизовать автоклавированием.
• Материалы, контактировавшие с образцами, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Хранение и срок годности

• Храните сухой продукт при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Приготовленную среду храните при температуре 2–8 °C.
• Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрывая контейнер для предотвращения комкования из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Храните контейнер в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывайте контейнер.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение установленного срока годности.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо утилизировать безопасным способом — автоклавированием и/или сжиганием. Утилизацию инфекционных материалов и материалов, контактировавших с образцами, выполняйте в соответствии с установленными лабораторными процедурами и действующими методиками обеззараживания.

Сравнительный контекст

В отличие от стандартных сред на основе пептонов животного происхождения, основа HiVeg® использует растительные пептоны и экстракты, что исключает компоненты животного происхождения из состава среды.

Комплект поставки

• Основа HiVeg среды для обогащения листерий HiMedia MV890A-100G, 100 г.