HiMedia MV870-500G TCBS HiVeg агар (селективный)

Селективная питательная среда HiMedia MV870-500G TCBS HiVeg агар (селективный) производства HiMedia — порошковый агар для выделения Vibrio cholerae и других энтеропатогенных видов Vibrio. HiMedia MV870-500G применяется для анализа клинических, пищевых и водных образцов, при этом среда не предназначена для оксидазного тестирования видов Vibrio и требует инкубации посевов при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Назначение

HiMedia MV870-500G TCBS HiVeg агар (селективный) рекомендован для селективного выделения Vibrio cholerae и других энтеропатогенных видов Vibrio из следующих типов образцов:

• клинические образцы: фекалии и другие материалы;
• пищевые образцы;
• образцы воды.

Среда предназначена только для диагностики in vitro и профессионального применения.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Среда изготовлена с использованием растительных пептонов вместо пептонов животного происхождения. Это исключает риски, связанные с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (TSE).

Принцип действия и интерпретация результатов

Тиосульфат-цитрат-жёлчно-сахарозный агар (TCBS) разработан Kobayashi и соавторами на основе селективной среды Nakanishi. Среда первоначально предназначалась для выделения V. cholerae и V. parahaemolyticus, однако большинство видов Vibrio образуют на ней крупные хорошо развитые колонии различной морфологии.

TCBS-агар также рекомендован Американской ассоциацией общественного здравоохранения (APHA) для селективного выделения V. cholerae и V. parahaemolyticus. Для выделения V. cholerae обычно применяют обогащение в щелочной пептонной воде HiVeg® (MV618) с последующим высевом на агар TCBS HiVeg®. В состав селективной модификации TCBS HiVeg® дополнительно включён холат натрия для повышения селективности.

Специальный пептон HiVeg® и дрожжевой экстракт обеспечивают среду азотистыми и углеродистыми соединениями, аминокислотами с длинной цепью, витаминами группы B и другими необходимыми питательными веществами. Синтетическое моющее средство № II и цитрат натрия подавляют грамположительные бактерии и колиформные микроорганизмы.

Тиосульфат натрия служит источником серы; в сочетании с цитратом железа он позволяет выявлять образование сероводорода (H₂S). Сахароза добавлена как сбраживаемый углевод для метаболизма видов Vibrio. Виды Vibrio, способные утилизировать сахарозу, образуют жёлтые колонии. Бромтимоловый синий и тимоловый синий выполняют функцию индикаторов pH. Щелочная реакция среды улучшает восстановление V. cholerae.

• Штаммы V. cholerae образуют жёлтые колонии вследствие ферментации сахарозы.
• V. alginolyticus также образует жёлтые колонии.
• V. parahaemolyticus не ферментирует сахарозу и образует сине-зелёные колонии.
• V. vulnificus также образует сине-зелёные колонии.
• Сбраживающие сахарозу виды Proteus могут образовывать жёлтые колонии.
• Отдельные штаммы V. cholerae из-за замедленной ферментации сахарозы могут образовывать зелёные или бесцветные колонии.

Среда обладает высокой селективностью в отношении видов Vibrio, однако отдельные изоляты Pseudomonas и Aeromonas также могут образовывать на TCBS-агаре сине-зелёные колонии. Любая колония на TCBS-агаре, отрицательная по H₂S, может рассматриваться как предположительно положительная на Vibrio.

Для окончательной идентификации необходимо выполнить дополнительные биохимические и серологические тесты.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 89,08 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Не автоклавируйте среду.
4. Охладите приготовленную среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте.
6. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Каловые образцы следует высевать в большом объёме или с высокой посевной нагрузкой, поскольку рост некоторых видов может подавляться из-за ферментации сахарозы и накопления кислот в среде.

Для клинических образцов применяйте утверждённые методы обращения с материалом. Для пищевых образцов используйте установленные методы отбора и обработки проб. Для образцов воды применяйте методы отбора и обработки, предусмотренные действующими руководствами и местными стандартами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения и мешающие факторы

1. Каловые образцы следует высевать в большом объёме или с высокой посевной нагрузкой, поскольку рост некоторых видов может подавляться из-за ферментации сахарозы и накопления кислот.
2. Отдельные изоляты Pseudomonas и Aeromonas также могут образовывать на TCBS-агаре сине-зелёные колонии.
3. Сбраживающие сахарозу виды Proteus могут образовывать жёлтые колонии.
4. TCBS-агар не подходит для проведения оксидазного тестирования видов Vibrio.
5. Отдельные штаммы V. cholerae из-за замедленной ферментации сахарозы могут образовывать зелёные или бесцветные колонии.
6. TCBS-агар обладает высокой селективностью в отношении видов Vibrio. Любая колония, отрицательная по H₂S, может рассматриваться как предположительно положительная на Vibrio.
7. Для полной идентификации необходимо проведение дополнительных биохимических и серологических тестов.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный, свободно сыпучий порошок от светло-жёлтого до светло-коричневого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный или слегка опалесцирующий гель сине-зелёного цвета в чашках Петри.
• Реакция: реакция 8,9%-ного водного раствора при 25 °C.
• pH: 8,8 ± 0,2.
• Диапазон pH: 8,60–9,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Селективность