HiMedia MV836-500G Основа HiVeg агара для Clostridium difficile

Питательная среда HiMedia MV836-500G Основа HiVeg агара для Clostridium difficile — сухая порошкообразная основа без компонентов животного происхождения для селективного выделения Clostridium difficile. Среда предназначена для анализа пищевых образцов и других материалов, при этом для полной идентификации выделенных колоний требуются дополнительные биохимические, серологические и другие подтверждающие тесты.

Назначение и область применения

Основа предназначена для селективного выделения Clostridium difficile из пищевых образцов и других видов исследуемого материала. Среда используется для первичного выделения C. difficile из фекальных образцов, а также для получения изолированных колоний при исследовании пищевых продуктов.

Продукт изготовлен на основе растительных пептонов без компонентов животного происхождения, что исключает риски, связанные с использованием пептонов животного происхождения, включая риски губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивных губчатых энцефалопатий (TSE).

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: MV836-500G
• Тип продукта: HiVeg™
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Физическая форма: порошок
• Масса: 500 г
• Материал упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE)
• Происхождение компонентов: без компонентов животного происхождения, растительная основа
• Температура хранения нерастворённого продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 34,55 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Осторожно нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует примерно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки CC Selective Supplement I (FD010), а также дефибринированную кровь лошади или овцы в количестве 7 % по объёму.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Заболевания, вызываемые Clostridium difficile — патогенным видом рода Clostridium, поражающим кишечник, — варьируют от псевдомембранозного колита (PMC) и колита, ассоциированного с антибиотиками (AAC), до хронических воспалительных заболеваний кишечника, послеоперационной диареи и диареи, не связанной с применением антибиотиков.

Smith и King впервые сообщили о присутствии C. difficile при инфекциях человека. George и соавторы рекомендовали использовать для выделения C. difficile из фекальных образцов среду, содержащую фруктозу и яичный желток. Ингибирование сопутствующей микрофлоры обеспечивалось добавлением селективных агентов — D-циклосерина и цефокситина.

Основа агара HiVeg® с 1 % агара изготовлена с полной заменой пептона животного происхождения на растительные пептоны. Среда не содержит индикатор нейтральный красный, присутствовавший в исходной рецептуре, поскольку среда предназначена для применения с кровью овцы или лошади.

Состав основы разработан для получения обильного роста C. difficile. Селективные агенты D-циклосерин и цефокситин подавляют рост большинства представителей семейства Enterobacteriaceae, а также Enterococcus faecalis, стафилококков, грамотрицательных анаэробных бацилл и видов Clostridium, отличных от C. difficile, которые могут присутствовать в фекальных образцах в большом количестве.

Добавление дефибринированной крови лошади в концентрации 7 % по объёму повышает выделяемость C. difficile и увеличивает размер колоний.

Для получения изолированных колоний распределите часть фекального образца по поверхности среды. Инкубируйте чашки в анаэробных условиях при 37 °C в течение 18–48 ч.

Через 48 ч C. difficile формирует серовато-белые, неправильной формы, приподнятые непрозрачные колонии диаметром 4–6 мм. Из-за присутствия антибиотиков типичная морфология C. difficile при окраске по Граму в колониях, выросших на этой среде, может отсутствовать. Для получения характерной морфологии выполните пересев на кровяной агар (M073).

Колонии C. difficile на этой среде не демонстрируют типичной флуоресценции и характерной окраски, тогда как другие виды Clostridia могут проявлять флуоресценцию. Поэтому для полной идентификации и подтверждения необходимо провести дополнительные исследования, включая окраску по Граму, оценку морфологии, биохимические тесты, определение специфического цитотоксина и клиническое наблюдение.

Методика работы с образцами

Тип образца

Пищевые образцы.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие правила работы микробиологической лаборатории при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности, установленные действующими руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения метода

1. Для дальнейшей идентификации необходимо провести дополнительные биохимические и серологические тесты.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный свободно текущий порошок кремового или жёлтого цвета.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Основная среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.
• После добавления 7 % по объёму дефибринированной крови лошади: в чашках Петри образуется непрозрачный гель вишнёво-красного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 6,91 % (масса/объём) при 25 °C.

• pH: 7,4 ± 0,2

Диапазон pH

7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в анаэробных условиях после добавления селективной добавки CC Selective Supplement I (FD010) и 7 % по объёму дефибринированной крови лошади, после инкубации при 35–37 °C в течение 48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Условия хранения и срок годности

Храните продукт при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере. Приготовленную среду храните при 2–8 °C. Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом состоянии, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности порошка. Неправильное хранение может привести к образованию комков