HiMedia MV636-500G Основа HiVeg агара с феноловым красным и полимиксином

Порошковая питательная среда HiMedia MV636-500G Основа HiVeg агара с феноловым красным и полимиксином массой 500 г для микробиологического анализа. Предназначена для выделения и идентификации видов Bacillus и патогенных стафилококков с применением селективной добавки полимиксина B и эмульсии яичного желтка.

Назначение и область применения

Среда рекомендована для выделения и идентификации видов Bacillus и патогенных стафилококков.

Типы исследуемых образцов

• Пищевые продукты.
• Вода.

Для пищевых образцов применяют соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам. Для образцов воды применяют соответствующие методы отбора и обработки проб согласно руководствам и местным нормативным требованиям.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности среды.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 23,01 г порошка в 450 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона стерильного раствора селективной добавки PolyB (FD003) до конечной концентрации 100 Ед/мл.
6. Добавьте 50 мл стерильной эмульсии яичного желтка (FD045).
7. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Bacillus cereus широко распространён в почве, растительности, воде и пыли. Микроорганизм выделяют из различных пищевых продуктов, включая овощи, мясо, зерновые культуры, пастеризованное свежее и сухое молоко, а также продукты переработки.

При благоприятных условиях Bacillus cereus размножается и вызывает желудочно-кишечные заболевания. Микроорганизм связан с двумя различными формами пищевого отравления:

• рвотной формой;
• диарейной формой.

Рвотная форма обусловлена высокостабильным токсином, сохраняющим активность после воздействия высокой температуры, трипсина, пепсина и экстремальных значений pH. Диарейная форма обусловлена энтеротоксином, чувствительным к воздействию тепла и кислот.

Ключевой реакцией дифференциальной идентификации Bacillus cereus, наиболее часто встречающегося и значимого вида в клинических лабораториях, от большинства других видов Bacillus является лецитиназная активность. Если неизвестный изолят продуцирует лецитиназу, предварительную идентификацию Bacillus cereus проводят также по морфологии колоний, гемолитической активности и результатам тестов на подвижность.

Среда MYP, или маннитол-яичный желток-полимиксиновый агар, разработанная Mossel и соавторами, рекомендуется APHA для выделения и количественного определения Bacillus cereus в пищевых продуктах. При высоком содержании в некоторых пищевых продуктах Bacillus cereus может продуцировать метаболиты, вызывающие клинические симптомы пищевого отравления.

Среда дифференцирует Bacillus cereus от других бактерий по следующим признакам:

• лецитиназная активность;
• ферментация маннитола;
• устойчивость к полимиксину, вводимому с селективной добавкой FD003.

Основа MYP HiVeg® полностью содержит растительные пептоны вместо пептонов животного происхождения, что исключает риски, связанные с использованием животных пептонов, включая риски губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивных губчатых энцефалопатий (TSE). Пептон HiVeg® и экстракт HiVeg® № 1 служат источниками азота.

Ферментацию маннитола выявляют с помощью фенолового красного: в результате образования кислоты колонии, ферментирующие маннитол, приобретают жёлтую окраску. Добавленная эмульсия яичного желтка способствует дифференциации лецитиназопродуцирующих колоний; такие колонии окружены зоной белого осадка. Полимиксин B сульфат (FD003) ограничивает рост грамотрицательных бактерий, таких как Escherichia coli и Pseudomonas aeruginosa.

Дифференциальные свойства среды позволяют отличать Bacillus cereus от других видов Bacillus по неспособности ферментировать маннитол и слабому спорообразованию. Bacillus cereus расщепляет компоненты яичного желтка и образует типичные колонии бациллярной формы.

Пробоподготовка и обращение с образцами

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

При работе с пищевыми образцами применяют соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам. При работе с образцами воды используют соответствующие методы отбора и обработки проб согласно руководствам и местным нормативным требованиям.

Ограничения метода

При получении неизвестного изолята с лецитиназной активностью предварительную идентификацию Bacillus cereus проводят только в совокупности с оценкой морфологии колоний, гемолитической активности и подвижности.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, легко сыпучий порошок от светло-жёлтого до светло-розового цвета.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Основа среды: прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.
• После добавления эмульсии яичного желтка (FD045): в чашках Петри образуется непрозрачный гель светло-оранжевого цвета.

Реакция

Реакция 4,6%-ного водного раствора при 25 °C:

• pH: 7,1 ± 0,2.

Диапазон pH

• pH: 6,90–7,30.

Культуральные характеристики

Характеристики определяют после инкубации при 32 °C в течение 18–40 ч с добавлением эмульсии яичного желтка (FD045) и селективной добавки PolyB (FD003).

• Соответствующие номера WDCM.
  ** Ранее обозначался как Bacillus subtilis subsp. spizizenii.

Техничес