HiMedia MV636-100G Основа HiVeg агара с феноловым красным и полимиксином

Питательная среда HiMedia MV636-100G «Основа HiVeg агара с феноловым красным и полимиксином» производства HiMedia в порошковой форме предназначена для приготовления селективно-дифференциального агара. Применяется для выделения и идентификации видов Bacillus и патогенных стафилококков в образцах пищевых продуктов и воды; рабочую среду готовят с добавлением эмульсии яичного желтка FD045 и селективной добавки PolyB FD003.

Назначение

Основа MYP HiVeg® агара рекомендована для выделения и идентификации видов Bacillus и патогенных стафилококков. Типы исследуемых образцов:

• пищевые продукты;
• вода.

Готовая среда применяется для дифференциации Bacillus cereus по лецитиназной активности, ферментации маннита и устойчивости к полимиксину. Для приготовления полной среды требуются стерильная селективная добавка PolyB FD003 и стерильная эмульсия яичного желтка FD045.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности среды.

Технические характеристики

Методика приготовления среды

1. Взвесьте 23,01 г основы и суспендируйте в 450 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона стерильного раствора добавки PolyB Selective Supplement FD003 до конечной концентрации 100 ед./мл.
6. Добавьте 50 мл стерильной эмульсии яичного желтка FD045.
7. Тщательно перемешайте среду и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Bacillus cereus широко распространён в почве, растительности, воде и пыли. Микроорганизм выделяют из различных пищевых продуктов, включая овощи, мясо, зерновые, пастеризованное свежее молоко, сухое молоко и продукты переработки.

При благоприятных условиях Bacillus cereus размножается и вызывает желудочно-кишечные заболевания. Микроорганизм связан с двумя формами пищевого отравления:

• рвотной формой;
• диарейной формой.

Рвотная форма обусловлена высокостабильным токсином, сохраняющим активность при высокой температуре, воздействии трипсина, пепсина и экстремальных значений pH. Диарейная форма связана с энтеротоксином, чувствительным к нагреванию и воздействию кислоты.

Ключевой реакцией дифференциальной идентификации Bacillus cereus — наиболее часто встречающегося и значимого вида в клинических лабораториях — является лецитиназная активность. При наличии лецитиназной активности неизвестный изолят предварительно идентифицируют как Bacillus cereus с дополнительной оценкой морфологии колоний, гемолитической реакции и подвижности.

Mossel и соавторы разработали маннитол-яично-желточно-полимиксиновый агар (MYP Agar), рекомендованный APHA для выделения и количественного определения Bacillus cereus в пищевых продуктах. При наличии в некоторых пищевых продуктах в большом количестве Bacillus cereus способен образовывать метаболиты, вызывающие клинические симптомы пищевого отравления.

Среда дифференцирует Bacillus cereus от других бактерий на основании:

• лецитиназной активности;
• ферментации маннита;
• устойчивости к полимиксину, входящему в состав добавки FD003.

Основа MYP HiVeg® агара изготовлена с полной заменой пептона животного происхождения на растительные пептоны. В состав входят пептон HiVeg® и экстракт HiVeg® № 1, обеспечивающие источник азота.

Ферментация маннита выявляется с помощью фенолового красного: в результате образования кислоты колонии, ферментирующие маннит, окрашиваются в жёлтый цвет. Добавленная эмульсия яичного желтка позволяет выявлять колонии, продуцирующие лецитиназу; такие колонии окружены зоной белого преципитата.

Сульфат полимиксина B, содержащийся в добавке FD003, ограничивает рост грамотрицательных бактерий, включая Escherichia coli и Pseudomonas aeruginosa. Дифференциальные свойства среды позволяют отличать Bacillus cereus от других видов Bacillus по неспособности ферментировать маннит и слабому спорообразованию. Bacillus cereus расщепляет компоненты яичного желтка и формирует типичные колонии в виде бацилл.

Типы образцов и обращение с ними

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим руководствам.

Для водных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно руководствам и местным стандартам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно утверждённым руководствам.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения метода

Если неизвестный изолят продуцирует лецитиназу, предварительную идентификацию Bacillus cereus необходимо проводить также по морфологии колоний, гемолитической реакции и результатам тестов на подвижность.

Рабочие характеристики

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до светло-розового цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.
• После добавления эмульсии яичного желтка FD045: в чашках Петри образуется непрозрачный гель светло-оранжевого цвета.

Реакция

Реакция водного раствора концентрацией 4,6 % масс./об. при 25 °C:

• pH: 7,1 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 6,90–7,30.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления эмульсии яичного желтка FD045 и селективной добавки PolyB FD003 при инкубации при 32 °C в течение 18–40 ч.

• Соответствующие номера WDCM.
  ** Ранее обозначался как Bacillus subtilis subsp. spizizenii.

Хранение и срок годности

• Храните продукт при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Приготовленную среду храните при 2–8 °C.
• Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков вследствие гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Храните продукт в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывайте контейнер.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение указанного срока годности