HiMedia MV537-100G Основа HiVeg среды Лёффлера

Основа HiVeg среды Лёффлера HiMedia MV537-100G на растительной основе для культивирования Corynebacterium diphtheriae. Применяется для выделения возбудителей дифтерии из клинических образцов, определения протеолиза, хромогенеза и продукции аскоспор.

Принцип измерения и область применения

Среда Лёффлера (в модификации HiVeg®) предназначена для первичной и вторичной изоляции и культивирования требовательных патогенных микроорганизмов, в особенности из мазков носа и горла. Среда способствует восстановлению вирулентности и идентификационных свойств (микроскопических и колониальных), которые могли быть утрачены при длительном инкубировании или повторном пересеве.

В данной модификации животные пептоны полностью заменены растительными (HiVeg®), что исключает риски заражения BSE/TSE (губчатой энцефалопатией). Высокое содержание сыворотки в конечном составе позволяет определять протеолитическую активность организмов, а также использовать среду для демонстрации пигментации и аскоспор.

Среду рекомендуют использовать параллельно с сывороточным теллуритом-агаром для селективной изоляции Corynebacteria.

Состав

Состав, г/л:

Методика приготовления и анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 8,75 г основы в 250 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Полностью растворите среду и стерилизуйте в автоклаве при температуре 115 °C (давление $\approx$0,07 МПа) в течение 20 минут.
3. Охладите до 50–55 °C и асептически добавьте 750 мл стерильной лошадиной сыворотки (RM1239).
4. Тщательно перемешайте и асептически разлейте в стерильные пробирки.
5. Стерилизуйте среду методом инсписсации (уваривания) при 80–85 °C в течение 2 часов в потоке пара в течение минимум 3 последовательных дней.

Процедура анализа

• Посев: Мазки из носоглотки или горла проводят непосредственно по поверхности среды. После инкубации готовят мазки с поверхности скоса.
• Тест на протеолиз: Инокулируйте скос среды и перед инкубацией залейте его средой Бруера-тиогликолятом HiVeg® (MV019). Инкубация проводится в течение 3–4 дней или до появления признаков протеолиза.

Технические характеристики

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободнотекущий порошок от кремового до желтого цвета.
• Цвет и прозрачность готовой среды:
  • Основа: светло-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий раствор.
  • После добавления сыворотки лошади: беловатый непрозрачный раствор.
• Реакция: pH 7,3 ± 0,2 (для 3,52% в/в водного раствора основы при 25 °C).
• Диапазон pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при добавлении 750 мл сыворотки лошади после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение основы: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C. Из-за гигроскопичности продукта необходимо плотно закрывать флакон для предотвращения комкования.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Требования к помещению: сухое, вентилируемое помещение, защищенное от экстремальных температур и источников возгорания.

Ограничения и предостережения

1. Для оптимального выделения C. diphtheriae необходимо получение мазков из носоглотки и горла.
2. Для окончательного подтверждения требуются дополнительные биохимические и серологические тесты.
3. Меры безопасности: использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица. Соблюдать стандартные правила микробиологической работы с образцами и культурами.
4. Утилизация: все загрязненные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией.