HiMedia MV537-100G Основа HiVeg среды Лёффлера

Основа питательной среды HiMedia MV537-100G «Основа HiVeg среды Лёффлера» — порошковый препарат массой 100 г. Основа предназначена для культивирования Corynebacterium diphtheriae из клинических образцов и чистых культур, при этом для приготовления среды требуется добавление 750 мл стерильной лошадиной сыворотки.

Назначение

Основа HiVeg среды Лёффлера рекомендована для:

• культивирования Corynebacterium diphtheriae из клинических образцов и чистых культур;
• выявления пигментообразования;
• определения протеолитической активности;
• выявления образования аскоспор.

Состав

Состав среды:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Принцип действия и интерпретация

Среда Лёффлера первоначально разработана Лёффлером, позднее модифицирована Perry и Petran, а также Buck.

Основа среды Лёффлера HiVeg® способствует первичной и вторичной изоляции и культивированию требовательных патогенных микроорганизмов, особенно микроорганизмов, выделяемых из носа и зева. Среда также способствует восстановлению вирулентности и других идентификационных свойств микроорганизмов — микроскопических и колониальных — после их утраты вследствие длительной инкубации или многократных пересевов.

В составе основы животный пептон полностью заменён растительными пептонами. Это позволяет исключить риски, связанные с использованием животных пептонов и губчатыми энцефалопатиями. Высокое содержание сыворотки помогает определять протеолитическую активность микроорганизмов. Среда также применяется для демонстрации пигментации и аскоспор.

Специальный пептон HiVeg® и экстракт HiVeg® обеспечивают микроорганизмы необходимыми питательными веществами для роста. Декстроза служит источником сбраживаемых углеводов и энергии.

Для посева мазки непосредственно прокатывают по поверхности среды, а после инкубации изготавливают мазки с поверхности скошенной части среды.

Для определения протеолиза:

1. Засейте скошенную часть среды.
2. До начала инкубации залейте скошенную часть тиогликолевой средой HiVeg производства Brewer (MV019).
3. Проводите инкубацию в течение 3–4 суток или дольше — до появления признаков протеолиза.

Для селективного выделения Corynebacteria основу среды Лёффлера HiVeg® следует использовать параллельно с агаром с теллуритом и сывороткой.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 8,75 г порошка в 250 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Полностью растворите среду.
3. Стерилизуйте среду в автоклаве при давлении 10 фунтов, что соответствует примерно 0,069 МПа или 0,69 бар, при 115 °C в течение 20 мин.
4. Охладите среду до 50–55 °C.
5. В асептических условиях добавьте 750 мл стерильной лошадиной сыворотки RM1239.
6. Тщательно перемешайте.
7. В асептических условиях разлейте среду в стерильные пробирки.
8. Стерилизуйте среду методом дробной стерилизации при 80–85 °C в течение 2 ч в свободно проходящем пару на протяжении не менее 3 последовательных дней.

Тип образца

Клинические образцы:

• мазки из носоглотки;
• мазки из зева.

Обращение с образцами и отходами

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания. При утилизации инфекционных материалов следует соблюдать установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцом, необходимо обеззараживать и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Меры предосторожности

• Перед вскрытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Для оптимального выделения C. diphtheriae при сборе образца необходимо использовать мазки из носоглотки и зева.
2. Для подтверждения результата необходимо дополнительно провести биохимические и серологические исследования.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Основа: прозрачный раствор светло-янтарного цвета, от прозрачного до слегка опалесцирующего.
• После добавления лошадиной сыворотки: непрозрачный раствор от беловатого до кремово-белого цвета.

Реакция

Реакция водного раствора основы с концентрацией 3,52 % масс./об. при 25 °C:

• pH: 7,3 ± 0,2.

Диапазон pH

pH приготовленной среды: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления 750 мл лошадиной сыворотки и инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Условия хранения и срок годности

• Сухой продукт хранить при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Приготовленную среду хранить при температуре 2–8 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия бутылку необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников возгорания.
• После каждого использования плотно закрывать контейнер.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение указанного срока годности.

Оценка эффективности

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с указаниями на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Сравнительный контекст

В отличие от основ питательных сред на основе животных пептонов, основа HiVeg среды Лёффлера изготовлена с полной заменой животного пептона растительными пептонами.

Совместимость

Для приготовления среды используется:

• стерильная лошадиная сыворотка RM1239 — 750 мл на 250 мл очищенной или дистиллированной воды с растворёнными 8,75 г основы;
• тиогликолевая среда HiVeg производства Brewer (MV019) — для заливки скошенной части при