HiMedia MV493-500G HiVeg агар с желчью, эскулином и азидом

Питательная агаризованная среда HiMedia MV493-500G HiVeg агар с желчью, эскулином и азидом предназначена для селективного выделения и предварительной идентификации фекальных стрептококков, масса упаковки — 500 г. Среда применяется для анализа пищевых продуктов и воды, хранится при 10–30 °C в плотно закрытой таре, а приготовленная среда — при 20–30 °C.

Назначение и область применения

HiMedia MV493-500G предназначен для селективного выделения и предварительной идентификации фекальных стрептококков, включая энтерококки.

Основной тип образца: пищевые продукты.

Среда также применяется для:

• прямого выделения энтерококков без мембранной фильтрации;
• подтверждения типичных колоний, выявленных после фильтрации проб воды через мембранные фильтры;
• дифференциации стрептококков группы D и стрептококков, не относящихся к группе D;
• ориентировочного различения представителей семейств Enterobacteriaceae, родов Klebsiella, Enterobacter, Serratia и других представителей Enterobacteriaceae по способности гидролизовать эскулин.

Состав

Состав среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров рабочих характеристик.

Среда относится к продуктам HiVeg® и изготовлена без компонентов животного происхождения.

Принцип действия и интерпретация

Среда Bile Esculin Azide HiVeg® Agar изготовлена с полной заменой пептона животного происхождения на растительные пептоны. Это исключает риски, связанные с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (TSE), характерные для использования пептонов животного происхождения.

Среда представляет собой модификацию агара с желчью и эскулином — Bile Esculin Agar. В модифицированной рецептуре снижена концентрация синтетического моющего вещества и дополнительно введён азид натрия.

Агар с желчью и эскулином первоначально был разработан Swan для выделения и идентификации стрептококков группы D из пищевых продуктов. Позднее было показано, что эта среда позволяет дифференцировать стрептококки группы D и стрептококки, не относящиеся к группе D. Стрептококки группы D имеют в клеточной стенке антиген липотейхоевой кислоты группы D.

Виды, ранее относимые к группе D и являющиеся обычными обитателями желудочно-кишечного тракта человека, обозначают как фекальные стрептококки или энтерококки. Уникальная способность энтерококков расщеплять эскулин была описана Meyer и Schonfeld. Энтерококки и стрептококки группы D гидролизуют эскулин с образованием эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с цитратом железа с образованием коричнево-чёрного осадка. Использование гидролиза эскулина для идентификации энтерококков впервые было описано Rochaix.

Агар с желчью и эскулином также может способствовать дифференциации Enterobacteriaceae, Klebsiella, Enterobacter и Serratia от других родов семейства Enterobacteriaceae по признаку гидролиза эскулина. Для идентификации энтерококков необходимо дополнительно выполнять другие тесты, включая определение устойчивости к соли.

Гидролизат HiVeg®, пептон HiVeg® № 3 и экстракт HiVeg® служат источниками углерода, азота, аминокислот, витаминов и необходимых питательных веществ для роста микроорганизмов. Синтетическое моющее вещество и азид натрия подавляют большинство сопутствующих бактерий.

Эскулин в составе среды гидролизуется до эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с цитратом железа с образованием тёмно-коричневого или чёрного комплекса, который визуализируется в виде зоны чёрного осадка вокруг колоний.

Если среду разливают в пробирки в виде скошенного агара, положительная реакция определяется по почернению более половины скошенной поверхности в течение 24–48 ч. Если почернение полностью отсутствует или в течение 24–48 ч почернело менее половины скошенной поверхности, результат оценивают как отрицательный.

Стрептококки группы viridans иногда дают слабоположительную реакцию. Виды Leuconostoc, Pediococcus и Lactococcus, вызывающие инфекции у человека, также могут давать положительный результат в тесте на гидролиз эскулина в присутствии желчи.

Для усиления роста энтерококков в среду можно добавить лошадиную сыворотку в количестве 50 мл/л.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 56,65 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 psi (примерно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.

Методика анализа проб воды

1. Профильтруйте подозрительные пробы воды через мембранные фильтры.
2. Асептически поместите мембранные фильтры на среду Slanetz и Bartley (M612I).
3. После инкубации отберите красные или бордовые колонии для дальнейшего подтверждения.
4. Асептически перенесите мембранный фильтр на чашку с агаром Bile Esculin Azide HiVeg®, предварительно прогретую до 44 °C.
5. Инкубируйте посев при температуре 44 ± 0,5 °C в течение 2 ч.
6. Подсчитайте все типичные колонии с коричнево-чёрным окрашиванием окружающей среды как кишечные энтерококки.

Альтернативный метод — прямое выделение энтерококков без использования мембранного фильтра. В этом случае инкубируйте посев при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для пищевых продуктов применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно установленным методическим рекомендациям.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Технические характеристики

• Назначение изделия: агар
• Масса: 500 г
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE)
• Происхождение компонентов: без компонентов животного происхождения, растительная основа
• Рабочий диапазон температуры хранения сухой среды: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C
• Расчётная концентрация водного раствора для контроля реакции: 5,67 % масс./об.
• pH водного раствора при 25 °C: 7,1 ± 0,2
• Допустимый диапазон pH: 6,90–7,30
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем

Контроль качества

Внешний вид

Однородный свободно сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель янтарного цвета с голубоватым оттенком.

Реакция среды

Реакцию определяют для 5,67%-ного водного раствора при 25 °C.

• pH: 7,1 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,90–7,30

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.