HiMedia MV482-100G Основа HiVeg агара для теста на ДНКазу

Микробиологическая питательная среда HiMedia MV482-100G Основа HiVeg агара для теста на ДНКазу на растительной основе, предназначенная для выявления активности дезоксирибонуклеазы. Применяется для обнаружения ДНКазной активности бактерий и грибов, особенно для идентификации патогенных Staphylococci, при хранении сухой среды при температуре ниже 30 °C.

Назначение

Основа агара HiVeg для теста на ДНКазу предназначена для выявления активности дезоксирибонуклеазы бактерий и грибов, особенно для идентификации патогенных Staphylococci.

Среда разработана на основе гидролизата HiVeg® без компонентов животного происхождения. Растительная основа позволяет избежать рисков, связанных с использованием казеинового ферментативного гидролизата животного происхождения, включая риски губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивных губчатых энцефалопатий (TSE).

Профиль продукта

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация результатов

Основа агара HiVeg для теста на ДНКазу является модификацией агара для теста на ДНКазу, предназначенного для выявления активности дезоксирибонуклеазы бактерий и грибов, а также для идентификации патогенных Staphylococci.

При добавлении толуидинового синего среда применяется для дифференциации и идентификации непигментированных видов Serratia, выделенных из клинических образцов и потенциально ошибочно идентифицируемых как виды Enterobacter и Klebsiella.

Активность ДНКазы обнаруживается благодаря деполимеризации ДНК. В результате вокруг зоны роста микроорганизмов образуется прозрачная зона, визуализируемая после заливки чашки 1 н. раствором соляной кислоты (HCl).

Если толуидиновый синий добавлен непосредственно в среду, активность ДНКазы вызывает появление ярко-розовых зон вокруг роста вследствие метахроматических свойств толуидинового синего.

Гидролизат HiVeg® и папаиновый перевар соевой муки обеспечивают среду необходимыми питательными веществами.

Активность ДНКазы и её связь с коагулазной активностью были впервые отмечены Weckman и Catlin для Micrococci: коагулазоположительные виды также являлись ДНКазоположительными. DiSalvo подтвердил результаты Weckman и Catlin и установил точную корреляцию между активностью ДНКазы и коагулазы. В эксперименте DiSalvo для активации фермента ДНКазы в среду были добавлены ДНК и хлорид кальция. Позднее Schreier модифицировал среду добавлением толуидинового синего. Модифицированная среда обеспечивала более быструю идентификацию Serratia marcescens и позволяла дифференцировать Serratia от других представителей семейства Enterobacteriaceae.

Некоторые штаммы Staphylococci могут подавляться на агаре для теста на ДНКазу из-за присутствия толуидинового синего. Для идентификации следует выполнять дополнительные подтверждающие тесты.

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию 42,0 г сухой среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения при частом перемешивании до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при температуре 121 °C в течение 15 мин и давлении 15 фунтов, что соответствует примерно 0,103 МПа.
4. Охладите среду до 45 °C.
5. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.
6. Перед стерилизацией среды добавьте регидратированное содержимое одного флакона толуидинового синего FD051. Альтернативный вариант — после инкубации залейте чашки 0,1%-ным раствором толуидинового синего FD051.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид порошка

Порошок светло-жёлтого цвета, может иметь слегка зеленоватый оттенок; однородный, сыпучий, без комков.

Гелеобразование

Образуется плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность

В чашках Петри образуется гель светло-янтарного цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий. При добавлении толуидинового синего FD051 образуется гель синего цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий.

Реакция среды

Реакция 4,2%-ного водного раствора: pH 7,3 ± 0,2 при 25 °C.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Интерпретация результатов контроля

При заливке чашки с агаром HiVeg для теста на ДНКазу 1 н. раствором HCl:

• + — прозрачная зона вокруг роста;
• − — отсутствие просветления вокруг роста.

При использовании агара для теста на ДНКазу с толуидиновым синим:

• + — розовая или красная зона вокруг роста;
• − — отсутствие изменения цвета вокруг роста.

Совместимые реагенты

Толуидиновый синий FD051 применяется в качестве добавки к среде: регидратированное содержимое одного флакона добавляют перед стерилизацией либо используют 0,1%-ный раствор для заливки чашек после инкубации.

Сравнительное отличие

HiMedia MV482-100G содержит растительный гидролизат HiVeg® вместо казеинового ферментативного гидролизата животного происхождения, тогда как вариант M482 относится к основам животного происхождения.