HiMedia MV457-500G Основа HiVeg среды для лептоспир, Кортоф

Основа HiVeg среды для лептоспир (модифицированная среда Кортофа) HiMedia MV457-500G на растительной основе. Рекомендуется для культивирования и поддержания жизнеспособности видов Leptospira.

Принцип измерения

Среда разработана на основе методики Кортофа для выделения лептоспир из крови, мочи, а также тканей почек и печени. В данной модификации (HiVeg™) животный пептон полностью заменён растительными пептонами для исключения рисков заражения BSE/TSE (губчатой энцефалопатией).

Растительный пептон обеспечивает аминокислоты и азотистые вещества, необходимые для роста бактерий. Раствор гемоглобина и инактивированная сыворотка крови служат дополнительными источниками питательных веществ. Соли поддерживают осмотический баланс, а фосфаты создают буферную систему.

Методика приготовления и использования

1. Приготовление основы (Base)

1. Суспендируйте 3,42 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте до полного растворения среды.
3. Разлейте по колбам порциями по 100 мл.
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 115 °C (давление $\approx$0,07 МПа) в течение 15 минут.
5. Охладите до 45–50 °C.

2. Приготовление раствора гемоглобина

1. К сгустку кролика (после удаления сыворотки) добавьте равный объём очищенной или дистиллированной воды.
2. Повторяйте циклы замораживания и оттаивания до полного гемолиза эритроцитов.
3. Стерилизуйте раствор с помощью фильтрации (фильтры Сейтца или Millipore).

3. Приготовление полной среды

1. К 100 мл стерильной основы добавьте 8 мл стерильной инактивированной сыворотки крови и 0,8 мл стерильного раствора гемоглобина.
2. Тщательно перемешайте.
3. При необходимости разлейте по 2–3 мл в стерильные пробирки или бутыли Bijou с винтовыми крышками.
4. Проверьте стерильность путем инкубации при 37 °C.

Особенности анализа и интерпретация

Все культуры инкубируют при комнатной температуре в темноте до 6 недель. Рост микроорганизмов происходит ниже поверхности среды.

• Контроль роста: Пробы из слоя в нескольких сантиметрах ниже поверхности бульона следует исследовать еженедельно с помощью прямой «мокрой» подготовки под темнопольным микроскопом.
• Визуальные признаки: Лептоспиры проявляют характерную «штопорообразную» подвижность. Рост проявляется в виде кольцевой области (диска) на глубине 1–3 см от поверхности.
• Важное примечание: Отсутствие кольцевой зоны роста не обязательно означает отсутствие лептоспир в пробе.
• Микроскопия: Для анализа следует взять небольшое количество материала из зоны диска. Окраска по Грамму не является удовлетворительной; для визуализации палочковидных форм рекомендуется фиксация метанолом и окрашивание по Гимзе.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Дополнительные параметры

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при добавлении инактивированной сыворотки крови и стерильного раствора гемоглобина после инкубации при 30 °C в течение 2–7 дней.

Область применения и ограничения

Применяется для диагностики лептоспироза — острого лихорадочного заболевания. Прямое культивирование крови является наиболее надежным методом обнаружения возбудителя в первую неделю болезни. В дальнейшем (в течение нескольких месяцев) лептоспиры могут быть выделены из неразбавленной мочи, а при аутопсии — из тканей почек и печени.

Ограничения: Поскольку Leptospira могут выделяться спорадически, посев последовательных образцов с интервалом не менее одного дня повышает вероятность получения положительного результата.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере. Из-за гигроскопичности продукта необходимо плотно закрывать бутыль для предотвращения комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания.
• Хранение готовой среды: 20–30 °C.
• Утилизация: Контаминированные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией.

Меры предосторожности

При работе с образцами и культурами следует соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности: использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица.