HiMedia MV457-500G Основа HiVeg среды для лептоспир, Кортоф

Питательная среда HiMedia MV457-500G Основа HiVeg среды для лептоспир, Кортоф — сухая порошкообразная основа для приготовления среды с конечным pH 7,2 ± 0,2. Основа предназначена для культивирования и поддержания видов Leptospira при хранении продукта при 10–30 °C.

Назначение

Основа HiVeg среды для лептоспир, Кортоф, рекомендована для культивирования и поддержания видов Leptospira. Продукт относится к средам на растительной основе: животный пептон полностью заменён растительными пептонами для исключения рисков, связанных с BSE/TSE.

Состав

Содержание компонентов приведено в граммах на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Методика приготовления

Приготовление основы

1. Взвесьте 3,42 г порошка и суспендируйте в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Распределите среду по колбам порциями по 100 мл.
4. Стерилизуйте автоклавированием при 115 °C в течение 15 мин. Давление, соответствующее 10 фунтам, составляет приблизительно 0,069 МПа.
5. Охладите основу до 45–50 °C.

Приготовление раствора гемоглобина

1. Удалите сыворотку из сгустка кроличьей крови.
2. Добавьте к сгустку равный объём очищенной или дистиллированной воды.
3. Многократно заморозьте и разморозьте смесь для гемолиза форменных элементов крови.
4. Простерилизуйте раствор фильтрацией через фильтр Зейтца или мембранный фильтр Millipore.

Приготовление готовой среды

1. К 100 мл стерильной основы добавьте 8 мл стерильной инактивированной сыворотки крови и 0,8 мл стерильного раствора гемоглобина.
2. Тщательно перемешайте.
3. При необходимости распределите готовую среду по 2–3 мл в стерильные флаконы или пробирки Bijou с завинчивающимися крышками.
4. Проверьте стерильность инкубацией при 37 °C.

Принцип действия и интерпретация результатов

Лептоспироз — острое лихорадочное заболевание, вызываемое представителями рода Leptospira. Прямое культивирование крови является наиболее надёжным способом обнаружения Leptospira в течение первой недели заболевания. После первой недели заболевания и в течение нескольких последующих месяцев лептоспиры могут быть выделены прямым культивированием неразбавленных образцов мочи. При вскрытии лептоспиры могут быть выделены из тканей почек и печени, а также из крови и мочи.

Основа среды для лептоспир, Кортоф, модифицированная, разработана для культивирования и поддержания видов Leptospira по составу, описанному Кортофом. В среде HiVeg®™ животный пептон полностью заменён растительными пептонами. Пептон HiVeg® обеспечивает аминокислотами и другими азотистыми веществами, необходимыми для роста бактерий. Раствор гемоглобина и инактивированная сыворотка крови служат дополнительными источниками питательных веществ для лептоспир. Соли обеспечивают микроорганизмы необходимыми питательными веществами. Фосфаты образуют буферную систему, а хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие и обеспечивает поступление необходимых ионов.

Все культуры инкубируют в темноте при комнатной температуре до 6 недель. Микроорганизмы растут ниже поверхности среды. Материал, отобранный на глубине нескольких сантиметров от поверхности бульонной культуры, следует еженедельно исследовать на наличие роста методом прямого влажного препарата в тёмном поле. Лептоспиры демонстрируют характерную винтообразную подвижность.

Пробирки следует проверять на наличие роста каждые 5–7 дней. Рост проявляется в виде кольцевой зоны, или диска, расположенного на 1–3 см ниже поверхности среды. Отсутствие кольцевой зоны роста не означает, что лептоспиры отсутствуют. Небольшое количество материала из области диска следует извлечь и исследовать микроскопически; окраска по Граму для этой цели неудовлетворительна. Микроколонии можно фиксировать метанолом и окрашивать по Гимзе для выявления палочковидных форм.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный, сыпучий порошок от беловатого до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: желтовато-коричневый, прозрачный или слегка опалесцирующий раствор после добавления сыворотки и раствора гемоглобина.

Реакция среды

Реакцию определяют для водного раствора с концентрацией 0,342 % масс./об. при 25 °C.

pH: 7,2 ± 0,2.

Диапазон pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления инактивированной сыворотки крови и стерильного раствора гемоглобина, после инкубации при 30 °C в течение 2–7 суток.

Ограничения применения

1. Посев последовательных образцов, отобранных с интервалом не менее 1 суток, повышает вероятность получения положительной культуры, поскольку выделение Leptospira может происходить периодически.

Требования безопасности и обращение с образцами

Перед вскрытием контейнера необходимо ознакомиться с этикеткой. При работе следует использовать защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица. При обращении с образцами и культурами необходимо соблюдать правила надлежащей микробиологической практики и стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными регламентами. Требования безопасности могут быть указаны в соответствующих паспортах безопасности.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Условия хранения и срок годности

• Условия хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: 20–30 °C.
• Состояние контейнера: плотно закрытый.
• Условия хранения: сухое вентилируемое помещение, защищённое от экстремальных температур и источников воспламенения.
• Срок использования: до даты истечения срока годности, указанной на этикетке.

После вскрытия контейнер необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом состоянии. Продукт обладает гигроскопичностью; нарушение условий хранения может привести к образованию комков. После каждого использования контейнер следует герметично закрывать. Рабочие характеристики среды должны сохраняться при использовании в пределах указанного срока годности и при соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо утилизировать безопасным способом с помощью автоклавирования и/или сжигания. При утилизации инфекционных материалов следует соблюдать установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцами, необходимо обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Технические характеристики

Эксплуатационные характеристики

Ожидаемые характеристики среды обеспечиваются при приготовлении и применении в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Отличие модифицированной основы HiVeg от основы с животным пептоном заключается в полной замене животного пептона растительными пептонами.

Производитель

HiMedia Laboratories Limited, Индия.