HiMedia MV457-100G Основа HiVeg среды для лептоспир, Кортоф

Основа питательной среды HiMedia MV457-100G Основа HiVeg среды для лептоспир, Кортоф с растительным пептоном и конечным pH 7,2 ± 0,2. Применяется для культивирования и поддержания видов Leptospira; готовая среда инкубируется в темноте при комнатной температуре до 6 недель, при этом рост происходит ниже поверхности среды.

Назначение

Основа HiVeg среды для лептоспир, Кортоф, предназначена для культивирования и поддержания видов Leptospira. Пептон животного происхождения полностью заменён растительными пептонами, что позволяет исключить риски, связанные с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (TSE).

Прямое культивирование крови является наиболее надёжным способом обнаружения Leptospira в течение первой недели заболевания. После первой недели заболевания и в течение нескольких последующих месяцев лептоспиры могут быть выделены при прямом культивировании неразбавленных образцов мочи. При исследовании аутопсийного материала лептоспиры могут быть выделены из тканей почек и печени, а также из крови и мочи.

Состав

Состав на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Принцип действия и интерпретация результатов

Лептоспироз — острое лихорадочное заболевание, вызываемое представителями рода Leptospira. Основа среды для лептоспир HiVeg®, Кортоф, модифицированная, разработана по составу, описанному Кортофом, для культивирования и поддержания видов Leptospira.

Пептон HiVeg® обеспечивает аминокислотами и другими азотсодержащими веществами, необходимыми для роста бактерий. Раствор гемоглобина и инактивированная сыворотка крови служат дополнительными источниками питательных веществ для лептоспир. Соли обеспечивают организм необходимыми питательными веществами. Фосфаты образуют буферную систему, а хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие и обеспечивает организм необходимыми ионами.

Все культуры инкубируют в темноте при комнатной температуре до 6 недель. Организмы растут ниже поверхности среды. Материал, отобранный на глубине нескольких сантиметров от поверхности бульонной культуры, следует еженедельно исследовать на наличие роста методом прямого влажного препарата в тёмном поле.

Лептоспиры демонстрируют подвижность, напоминающую движение штопора. Пробирки на наличие роста исследуют каждые 5–7 дней. Рост формируется в виде кольцевой зоны (диска) на глубине 1–3 см ниже поверхности среды. Отсутствие кольцевой зоны роста не обязательно означает отсутствие лептоспир.

Небольшое количество материала из области диска роста извлекают и исследуют микроскопически; окраска по Граму для этого исследования неудовлетворительна. Микроколонии можно фиксировать метанолом и окрашивать по Гимзе для выявления палочковидных форм.

Методика приготовления среды

Приготовление основы

1. Суспендируйте 3,42 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Распределите среду по 100 мл в колбы.
4. Стерилизуйте автоклавированием при 115 °C в течение 15 мин. Это соответствует давлению 10 фунтов, примерно 0,069 МПа.
5. Охладите среду до 45–50 °C.

Приготовление раствора гемоглобина

1. У кроличьего сгустка крови удалите сыворотку.
2. Добавьте к сгустку равный объём очищенной или дистиллированной воды.
3. Для гемолиза форменных элементов крови многократно замораживайте и размораживайте смесь.
4. Стерилизуйте раствор фильтрованием через фильтр Зейтца или мембранный фильтр.

Приготовление полной среды

1. К 100 мл стерильной основы добавьте 8 мл стерильной инактивированной сыворотки крови и 0,8 мл стерильного раствора гемоглобина.
2. Тщательно перемешайте.
3. При необходимости распределите среду по 2–3 мл в стерильные флаконы или пробирки Бижу с завинчивающимися крышками.
4. Проверьте стерильность инкубацией при 37 °C.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют для среды с добавлением инактивированной сыворотки крови и стерильного раствора гемоглобина после инкубации при 30 °C в течение 2–7 суток.

Тип образца

Производитель не указал перечень образцов.

Обращение с образцами и безопасность

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Перед открытием контейнера прочитайте этикетку. При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица. Соблюдайте надлежащие правила работы в микробиологической лаборатории. При обращении с образцами необходимо выполнять стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами. Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения метода

Последовательное исследование образцов, полученных с интервалом не менее 1 суток, повышает вероятность положительного результата, поскольку выделение Leptospira может происходить непостоянно.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, свободно текучий порошок от почти белого до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

После добавления сыворотки и раствора гемоглобина образуется прозрачный или слегка опалесцирующий раствор жёлто-коричневого цвета.

Реакция

Реакцию определяют для водного раствора концентрацией 0,342 % масс./об. при 25 °C.

• pH: 7,2 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,00–7,40

Технические характеристики

• Назначение изделия: основа
• Масса: 100 г
• Температура хранения: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C

Условия хранения и срок годности

Храните порошок при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере, а приготовленную среду — при температуре 20–30 °C. Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

После вскрытия контейнер необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности порошка. Неправильное хранение может привести к образованию комков. Храните продукт в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После использования плотно закрывайте контейнер. Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение установленного срока годности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов путём автоклавирования и/или сжигания. Соблюдайте установленные лабораторные процедуры утилизации инфекционных материалов. Материалы, контактировавшие с образцами, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными методиками.