HiMedia MV457-100G Основа HiVeg среды для лептоспир, Кортоф

Основа сухой питательной среды HiVeg для лептоспир (модификация Кортофа) HiMedia MV457-100G на растительной основе. Рекомендуется для культивирования и поддержания жизнеспособности видов Leptospira.

Принцип измерения

Среда разработана по методике Кортофа для выделения и выращивания лептоспир. В данной модификации (HiVeg) животный пептон полностью заменён растительными пептонами для исключения рисков, связанных с БМЭ/ТГЭ (коровьим/губчатым губчатым методом энцефалопатии).

Растительный пептон HiVeg обеспечивает аминокислоты и азотистые вещества, необходимые для роста бактерий. Раствор гемоглобина и инактивированная сыворотка крови служат дополнительными источниками питательных веществ. Соли обеспечивают минеральный обмен, фосфаты создают буферную систему, а хлорид натрия поддерживает осмотический баланс.

Лептоспиры растут ниже поверхности среды. Признаком роста является появление кольцевидной зоны (диска) на глубине 1–3 см от поверхности.

Методика приготовления и анализа

1. Приготовление основы

1. Суспендируйте 3,42 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте до полного растворения.
3. Разлейте по колбам порциями по 100 мл.
4. Стерилизуйте в автоклаве при 115 °C (давление $\approx$ 0,07 МПа) в течение 15 минут.
5. Охладите до 45–50 °C.

2. Приготовление раствора гемоглобина

1. К сгустку кроличьей крови (после удаления сыворотки) добавьте равный объём очищенной или дистиллированной воды.
2. Повторяйте циклы замораживания и оттаивания до полного гемолиза эритроцитов.
3. Стерилизуйте полученный раствор методом фильтрации через фильтры Сейтца или миллипоровые фильтры.

3. Приготовление полной среды

1. К 100 мл стерильной основы добавьте 8 мл стерильной инактивированной сыворотки крови и 0,8 мл стерильного раствора гемоглобина.
2. Тщательно перемешайте.
3. При необходимости разлейте по 2–3 мл в стерильные пробирки или флаконы Bijou с винтовыми крышками.
4. Проверьте стерильность путем инкубации при 37 °C.

4. Процедура анализа и интерпретация

• Инкубируйте культуры при комнатной температуре в темноте до 6 недель.
• Проверяйте пробы на наличие роста каждые 5–7 дней.
• Для обнаружения роста еженедельно берите пробу из слоя среды на несколько сантиметров ниже поверхности и исследуйте методом прямой «мокрой» подготовки под темнопольным микроскопом.
• Лептоспиры характеризуются штопореобразной подвижностью.
• При обнаружении кольцевидной зоны роста извлеките небольшое количество материала из области диска и исследуйте микроскопически (окраска по Грамму неэффективна). Микроколонии можно фиксировать метанолом и окрашивать по Гимзе для визуализации палочковидных форм.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Общие параметры

• Тип продукта: HiVeg™ (без компонентов животного происхождения)
• Физическая форма: порошок
• Цвет порошка: от почти белого до желтого, гомогенный свободнотекущий порошок
• Цвет и прозрачность готовой среды: желтовато-коричневый, от прозрачного до слегка опалесцирующего раствор (после добавления сыворотки и гемоглобина)
• Диапазон pH: 7,00–7,40
• Материал упаковки: ПЭВП (HDPE)

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при добавлении инактивированной сыворотки крови и стерильного раствора гемоглобина после инкубации при 30 °C в течение 2–7 дней.

Область применения и ограничения

Среда применяется для выделения лептоспир из крови (в первую неделю болезни), мочи (после первой недели и в течение нескольких месяцев) или из тканей почек и печени при аутопсии.

Ограничения:

• Из-за спорадического выделения Leptospira рекомендуется культивировать последовательные образцы с интервалом не менее одного дня для повышения вероятности получения положительного результата.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия плотно закрывайте флакон во избежание комкования. Хранить в сухом проветриваемом помещении, вдали от источников воспламенения и экстремальных температур.

Меры предосторожности и утилизация

• Использовать средства индивидуальной защиты: перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдать стандартные правила микробиологической работы с образцами.
• Утилизация: все загрязненные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией.