HiMedia MV445-500G Spirit Blue HiVeg агар

Агар HiMedia MV445-500G Spirit Blue HiVeg для выявления и количественного определения липолитических микроорганизмов, выпускаемый в виде порошка массой 500 г. Применяется для анализа изолированных микроорганизмов из молочных образцов; для корректного проявления липазной активности рекомендуется использовать стеклянные чашки вместо одноразовых пластиковых.

Назначение

Spirit Blue HiVeg агар предназначен для выявления и количественного определения липолитических микроорганизмов. Тип образца: изолированные микроорганизмы из молочных образцов.

Рост липазопродуцирующих микроорганизмов может вызывать дефекты вкуса молока и молочных продуктов с высоким содержанием жира. Некоторые свободные жирные кислоты, образующиеся под действием липолитических ферментов, имеют низкий порог восприятия и даже при низких концентрациях придают продукту прогорклый вкус.

Состав

Состав среды:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности среды.

Принцип действия и интерпретация

Липиды, включая жиры и масла, являются высоковосстановленными соединениями. При катаболизме липида может образовываться больше пар электронов на грамм вещества и, следовательно, высвобождаться больше энергии, чем при катаболизме углеводов или белков.

Процесс расщепления липидов обеспечивается ферментом липазой. Микроорганизмы, продуцирующие липазу, называют липолитическими.

Агар Spirit Blue готовят по рецептуре Starr; среда рекомендована Американской ассоциацией общественного здравоохранения (APHA) для выявления и количественного определения липолитических микроорганизмов. Базовую среду дополняют липидным субстратом для выявления, количественного определения и изучения липолитических микроорганизмов.

В более ранних рецептурах для индикации липолиза иногда применяли красители, которые могли подавлять рост микроорганизмов. Starr показал, что краситель Spirit Blue инертен и подходит для индикации липолиза: результат визуализируется в виде прозрачных зон вокруг колоний.

Spirit Blue HiVeg агар содержит растительные пептоны вместо пептонов животного происхождения, поэтому среда не связана с рисками губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивной губчатой энцефалопатии (TSE). Гидролизат HiVeg® и дрожжевой экстракт являются источниками углерода, азота, витаминов и минеральных веществ. Spirit Blue — краситель, выполняющий функцию индикатора липолиза.

Липазный субстрат

В качестве источника липидов могут применяться хлопковый жмых, сливки, оливковое масло и другие материалы.

Для приготовления устойчивой эмульсии:

1. Растворите 10 г акации или 1 мл полисорбата 80 в 400 мл тёплой дистиллированной воды.
2. Добавьте 100 мл хлопкового или оливкового масла.
3. Энергично перемешайте для эмульгирования.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 32,15 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения и полностью растворите среду.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 psi (ориентировочно 0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Медленно добавьте 30 мл липазного субстрата при перемешивании, чтобы обеспечить равномерное распределение.
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Методика работы с образцами

1. Приготовьте разведение исследуемого продукта 1:10 или другое подходящее разведение.
2. Нанесите 0,1 мл выбранного разведения на поверхность среды.
3. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 24–48 ч.
4. Липолитические микроорганизмы образуют вокруг каждой колонии прозрачную зону и/или тёмно-синее окрашивание вокруг колонии и под ней.

Для оценки культуральных характеристик среду с добавленным липазным субстратом инкубируют при 35–37 °C в течение 48–72 ч.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный, сыпучий, свободно текущий порошок от кремового до зеленовато-жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с гелем 1,7 % агара.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: базовая среда образует гель синего цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий; после добавления липазного субстрата в чашках Петри образуется гель лавандового цвета, слегка опалесцирующий.
• Реакция: реакция водного раствора с массовой концентрацией 3,22 % при 25 °C.
• pH: 6,60–7,00.
• Расчётный pH: 6,8 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 48–72 ч на среде с добавленным липазным субстратом.

* Соответствующие номера WDCM.

Технические характеристики

• Назначение изделия: агар, питательная среда для выявления и количественного определения липолитических микроорганизмов.
• Производитель: HiMedia.
• Модель и фасовка: MV445-500G.
• Масса: 500 г.
• Тип продукта: HiVeg™.
• Происхождение компонентов: без компонентов животного происхождения, растительная основа (Animal Free, Veg).
• Физическая форма: порошок.
• Тип упаковки: ПЭВП (полиэтилен высокой плотности).
• Концентрация для приготовления среды: 32,15 г/1000 мл.
• Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,60–7,00.
• Стерилизация: автоклавирование при 121 °C в течение 15 мин, давление 15 psi (ориентировочно 0,10 МПа).
• Добавляемый липазный субстрат: 30 мл на приготовленный объём среды после охлаждения до 45–50 °C.

Ограничения применения

Для корректного проявления липазной активности рекомендуется использовать стеклянные чашки вместо одноразовых пластиковых чашек.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения: плотно закрытая ёмкость.
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C.
• Влажность: хранить в сухом проветриваемом помещении.
• Дополнительные требования: защищать от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После вскрытия: хранить продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После каждого использования ёмкость необходимо плотно закрывать.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение указанного срока годности и хранении при рекомендованной температуре.

Меры предосторожности

При работе с образцами и культурами необходимо использовать:

• защитные перчатки;
• защитную одежду;
• средства защиты глаз;
• средства защиты лица.

Следует соблюдать правила надлежащей микробиологической лабораторной практики и стандартные меры предосторожности, установленные для работы с образцами. Требования безопасности необходимо уточнять в соответствующих паспортах безопасности.

Оценка эффективности

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при приготовлении и применении в соответствии с инструкцией на этикетке, а также при использовании продукта в пределах установленного срока годности и соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо безопасно утилизировать автоклавированием и/или сжиганием.

Материалы, контактировавшие с образцами, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными процедурами обращения с инфекционными материалами.