HiMedia MV434-500G Основа GC HiVeg агара

Порошкообразная питательная среда HiMedia MV434-500G Основа GC HiVeg агара, производитель HiMedia, предназначенная для приготовления селективной среды с добавлением крови или гемоглобина и других добавок. Основа применяется для селективного выделения и культивирования гонококков, при этом для роста требовательных микроорганизмов необходимо добавление гемоглобина и ростовых добавок.

Назначение

Основа GC HiVeg агара с добавлением крови или гемоглобина и других добавок рекомендуется для селективного выделения и культивирования гонококков. Продукт предназначен для микробиологического анализа клинических образцов, включая мочу и респираторные экссудаты.

Состав

Состав рассчитан на приготовление двойной концентрации основы:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с установленными эксплуатационными параметрами.

Технические характеристики

Принцип действия и интерпретация

Большинство гонококковых инфекций представляет собой неосложнённые инфекции нижних отделов половых путей, вызываемые прямым инфицированием цилиндрического эпителия слизистых оболочек. Возбудителем гонококковых инфекций является Neisseria gonorrhoeae.

Большинство штаммов Neisseria предъявляет сложные требования к условиям роста. Некоторые штаммы чрезвычайно чувствительны к жирным кислотам, поэтому в питательную среду необходимо включать растворимый крахмал. Среда, разработанная Johnston, позволяла получать рост Neisseria в течение 24 ч вместо обычных 48 ч. Позднее Carpenter и Morton модифицировали эту среду добавлением гемоглобина.

Thayer и Martin повысили селективность GC-среды введением антибиотиков колистина, ванкомицина и нистатина — добавки V.C.N. (FD023). Позднее для дополнительного повышения селективности к V.C.N. был добавлен лактат триметоприма; соответствующая добавка имеет обозначение V.C.N.T. (FD024).

Для культивирования требовательных микроорганизмов среду необходимо дополнять факторами роста, основным источником которых является дрожжевой экстракт. Дрожжевой экстракт может быть заменён химически определённой добавкой с факторами роста, содержащимися в дрожжевом экстракте, — витаминной ростовой добавкой в двойной упаковке (FD025).

Фактор X, или гемин, необходимый для роста видов Haemophilus, обеспечивается гемоглобином (FD022). Другие добавки обеспечивают фактор V, то есть НАД — никотинамид-адениндинуклеотид, — для видов Haemophilus, а также аминокислоты, коферменты, ионы железа и другие компоненты, улучшающие рост патогенных видов Neisseria.

Основа GC HiVeg® агара может использоваться для приготовления среды Thayer–Martin при добавлении FD027, содержащей автолизат дрожжей как источник необходимых факторов роста, и антибиотиков V.C.N.T. как селективных компонентов.

В добавке V.C.N.T. (FD024) ванкомицин в концентрации 3 мг/л был заменён линкомицином, поскольку линкомицин оказался менее ингибирующим для гонококков. Для повышения селективности среды в отношении дрожжевых загрязнителей, регулярно обнаруживаемых в вагинальных образцах, нистатин был заменён амфотерицином B. Модифицированная добавка получила обозначение Linco T Supplement (FD026).

Некоторые штаммы гонококков оказались чувствительными к обычно применяемому ванкомицину в концентрации 3 мг/л. Поэтому концентрацию ванкомицина снизили до 2 мг/л для обеспечения роста чувствительных штаммов. Модифицированная добавка с пониженной концентрацией ванкомицина и амфотерицином B получила обозначение Vanclo T Supplement (FD028).

В основе GC HiVeg® агара используются пептоны растительного происхождения вместо пептонов животного происхождения, благодаря чему среда не содержит рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (TSE).

Специальный пептон обеспечивает микроорганизмы необходимыми питательными веществами. Крахмал нейтрализует токсичные метаболиты, образуемые Neisseria. Фосфаты предотвращают изменение pH из-за образования аминов, которое может влиять на выживание микроорганизмов. Фактор X, или гемин, необходимый для видов Haemophilus, обеспечивается гемоглобином. Остальные добавляемые компоненты обеспечивают фактор V, то есть НАД, для видов Haemophilus, а также аминокислоты, коферменты, ионы железа и другие вещества, улучшающие рост патогенных видов Neisseria.

Методика приготовления среды

1. Для приготовления двойной концентрации основы суспендируйте 36,0 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Отдельно суспендируйте 10 г ростовой добавки FO Growth Supplement (FD022) в 500 мл очищенной или дистиллированной воды для получения однородного 2%-ного раствора.
4. Отдельно стерилизуйте оба раствора автоклавированием при температуре 121 °C и давлении ≈0,103 МПа (15 psi; ≈1,03 бар) в течение 15 мин.
5. Охладите растворы до 45–50 °C.
6. Равномерно смешайте оба раствора.
7. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое двух флаконов селективной добавки GC Selective Supplement (FD021).
8. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.
9. Для повышения селективности среды можно добавить одну из антибиотических добавок:
   • V.C.N. Supplement (FD023) — два флакона на литр;
   • V.C.N.T. Supplement (FD024) — два флакона на литр;
   • Linco T Supplement (FD026) — два флакона на литр;
   • Vanclo T Supplement (FD028) — два флакона на литр.
10. Для улучшения питательных свойств среды можно добавить одну из ростовых добавок:
    • Vitamino Growth Supplement (FD025) — два флакона на литр;
    • Yeast Autolysate Supplement (FD027) — два флакона на литр.

Приготовление шоколадного кровяного агара

1. Для приготовления среды одинарной концентрации суспендируйте 3,6 г порошка в 100 мл дистиллированной воды.
2. Стерилизуйте среду автоклавированием при температуре 121 °C и давлении ≈0,103 МПа (15 psi; ≈1,03 бар) в течение 15 мин.
3. Добавьте дефибринированную кровь в количестве 5 % об./об.
4. Тщательно перемешайте.
5. Нагревайте смесь при 80 °C в течение 10 мин.

Работа с образцами

Не используйте вату для сбора образцов. Выполняйте посев сразу после сбора образца.

Образцы следует штриховать по поверхности чашек таким образом, чтобы на одном участке был плотный посев, а на других участках — более разреженный. Инкубацию проводят при 37 °C в атмосфере с относительной влажностью 70 % и содержанием диоксида углерода (CO₂) 5–10 %.

Все предположительно относящиеся к Neisseria колонии необходимо подтверждать тестами на ферментацию углеводов и другими серологическими тестами.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в присутствии 5–10 % диоксида уг