HiMedia MV434-100G Основа GC HiVeg агара

Микробиологическая питательная среда HiMedia MV434-100G Основа GC HiVeg® агара — сухая основа растительного происхождения для приготовления селективной среды, рекомендуемой для выделения и культивирования гонококков. Основа применяется с добавлением крови или гемоглобина и других ростовых добавок; масса упаковки составляет 100 г, температура хранения — 10–30 °C.

Назначение

Основа GC HiVeg® агара с добавлением крови или гемоглобина и других добавок предназначена для селективного выделения и культивирования гонококков. Среда может использоваться как основа для приготовления среды Тайера—Мартина.

Состав

Состав среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Методика приготовления среды

1. Взвесьте 36,0 г основы и суспендируйте в 500 мл очищенной или дистиллированной воды для получения основы двойной концентрации.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Отдельно суспендируйте 10 г ростовой добавки FO Growth Supplement (FD022) в 500 мл очищенной или дистиллированной воды для приготовления однородного 2%-ного раствора.
4. Стерилизуйте оба раствора отдельно в автоклаве при давлении 15 psi (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите растворы до 45–50 °C.
6. Равномерно смешайте оба раствора.
7. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое двух флаконов селективной добавки GC Selective Supplement (FD021).
8. Тщательно перемешайте среду и разлейте в стерильные чашки Петри.

Добавки для повышения селективности

Для повышения селективности среды можно добавлять антибиотические добавки:

• V.C.N. Supplement (FD023): два флакона на 1 л;
• V.C.N.T. Supplement (FD024): два флакона на 1 л;
• Linco T Supplement (FD026): два флакона на 1 л;
• Vanclo T Supplement (FD028): два флакона на 1 л.

Добавки для усиления питательных свойств

Для усиления питательных свойств среды можно добавлять:

• Vitamino Growth Supplement (FD025): два флакона на 1 л;
• Yeast Autolysate Supplement (FD027): два флакона на 1 л.

Приготовление шоколадного кровяного агара

1. Для приготовления среды одинарной концентрации суспендируйте 3,6 г основы в 100 мл дистиллированной воды.
2. Стерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 psi (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
3. Добавьте дефибринированную кровь в концентрации 5 % об./об.
4. Тщательно перемешайте.
5. Нагревайте среду при 80 °C в течение 10 мин.

Принцип действия и интерпретация

Большинство гонококковых инфекций представляет собой неосложнённые инфекции нижних отделов половых путей, вызываемые непосредственным инфицированием цилиндрического эпителия слизистых оболочек. Возбудителем гонококковых инфекций является Neisseria gonorrhoeae.

Большинство штаммов Neisseria имеет сложные требования к условиям культивирования. Некоторые штаммы обладают высокой чувствительностью к жирным кислотам, поэтому в питательную среду необходимо включать растворимый крахмал.

Среда, разработанная Johnston, позволяла получать рост Neisseria в течение 24 ч вместо обычных 48 ч. Позднее Carpenter и Morton модифицировали эту среду, добавив гемоглобин. Thayer и Martin повысили селективность GC-среды включением антибиотиков колистина, ванкомицина и нистатина — добавки V.C.N. (FD023).

Позднее к V.C.N. был добавлен лактат триметоприма для дальнейшего повышения селективности среды — добавка V.C.N.T. (FD024). Для культивирования требовательных микроорганизмов среду следует дополнять необходимыми ростовыми факторами, преимущественно поставляемыми дрожжевым экстрактом (FD027). Дрожжевой экстракт может быть заменён химически определённой добавкой с необходимыми ростовыми факторами, доступными из дрожжевого экстракта, — Vitamino Growth Supplement (Twin Pack) (FD025).

Фактор X, необходимый для роста требовательных видов Haemophilus, поставляется гемоглобином (FD022). Остальные добавки обеспечивают фактор V, то есть НАД (никотинамидадениндинуклеотид), необходимый для видов Haemophilus, а также аминокислоты, коферменты, ионы железа и другие компоненты, улучшающие рост патогенных видов Neisseria.

Основа GC HiVeg® агара может использоваться для приготовления среды Тайера—Мартина с добавлением FD027, содержащей автолизат дрожжей как источник необходимых ростовых факторов, и антибиотиков V.C.N.T. в качестве селективных агентов.

В добавке V.C.N.T. (FD024) ванкомицин в концентрации 3 мг/л был заменён линкомицином, поскольку линкомицин оказывает меньшее ингибирующее действие на гонококки. Нистатин также был заменён амфотерицином B для повышения селективности среды в отношении дрожжевых контаминантов, регулярно обнаруживаемых в вагинальных образцах. Модифицированная добавка получила название Linco T Supplement (FD026).

Некоторые штаммы гонококков оказались чувствительными к регулярно используемой концентрации ванкомицина 3 мг/л. Поэтому концентрация ванкомицина была снижена до 2 мг/л для обеспечения роста чувствительных штаммов. Модифицированная добавка со сниженной концентрацией ванкомицина и амфотерицином B получила название Vanclo T Supplement (FD028).

Основа GC HiVeg® агара приготовлена с использованием растительных пептонов вместо пептонов животного происхождения, что исключает риски, связанные с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивной губчатой энцефалопатией (TSE). Специальный пептон HiVeg® обеспечивает микроорганизмы необходимыми питательными веществами.

Крахмал нейтрализует токсичные метаболиты, образуемые Neisseria. Фосфаты предотвращают изменения pH, вызванные образованием аминов, которые могут влиять на выживаемость микроорганизмов. Фактор X, или гемин, необходимый для видов Haemophilus, поставляется гемоглобином. Другие добавляемые компоненты обеспечивают фактор V — НАД (никотинамидадениндинуклеотид), необходимый для видов Haemophilus, а также аминокислоты, коферменты, ионы железа и другие вещества, улучшающие рост патогенных видов Neisseria.

Образцы

Типы клинических образцов:

• моча;
• отделяемое дыхательных путей;
• другие клинические образцы.

Отбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

При сборе образцов не используйте ватные тампоны. После отбора образец необходимо немедленно инокулировать.

Образцы следует штриховым посевом наносить на поверхность чашек таким образом, чтобы получить участки с плотным и разреженным посевом.

Условия инкубации и подтверждение

Инкубируйте посевы при 37 °C в атмосфере с относительной влажностью 70 % и содержанием углекислого газа (CO₂) 5–10 %.

Все предположительно идентифицированные микроорганизмы рода Neisseria необходимо подтверждать тестами на ферментацию углеводов и другими серологическими тестами.

Ограничения применения

1. Для роста требовательных микроорганизмов, таких как Haemophilus и гонококки, необходимо добавлять ростовые добавки, включая гемоглобин и витаминные ростовые добавки.
2. Для всех выросших колоний необходимо проводить подтверждающие тесты.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При работе с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Правила безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный свободно текучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Прочный гель, сопоставимый с 1,0%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-жёлтого цвета.
• После добавления 2 % гемоглобина: в чашках Петри образуется непрозрачный гель шоколадно-коричневого цвета.

Реакция среды

Реакция 3,6%-ного водного раствора, измеренная при 25 °C: pH 7,2 ± 0,2.

pH

pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяли в присутствии 5–10 % углекислого газа (CO₂) и при относительной влажности 70 %, с добавлением стерильных FO Growth Supplement (FD022) и GC Selective Supplement (FD021), после инкубации при