HiMedia MV344-500G Основа агара с активированным углем, HiVeg

Микробиологическая питательная среда HiMedia MV344-500G Основа агара с активированным углем, HiVeg — сухая порошкообразная основа на растительной основе для приготовления угольного агара. Среда с добавками предназначена для культивирования Bordetella pertussis при производстве вакцин, поддержания штаммовых культур и выделения возбудителей из носовых мазков; температура хранения продукта составляет 10–30 °C.

Назначение и область применения

Основа агара с активированным углем HiVeg применяется после добавления стерильной дефибринированной крови и селективной добавки Bos (FD004) для:

• культивирования Bordetella pertussis при производстве вакцин;
• поддержания штаммовых культур;
• первичного выделения Bordetella pertussis;
• выделения и культивирования Haemophilus influenzae при добавлении лошадиной крови;
• замены агара Борде—Жангу при выделении Bordetella pertussis.

Тип образца: носовые мазки.

Принцип действия и интерпретация

Род Bordetella включает четыре вида: Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis, Bordetella bronchiseptica и Bordetella avium. Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis используют человека как единственного хозяина, Bordetella bronchiseptica встречается у широкого круга животных и иногда у человека, а Bordetella avium обнаруживается у птиц.

Виды Bordetella являются облигатными аэробами и характеризуются невысокой метаболической активностью. Виды неподвижны, за исключением Bordetella bronchiseptica. Bordetella pertussis является основной причиной коклюша, а Bordetella parapertussis связана с более лёгкой формой заболевания.

Первичное выделение Bordetella pertussis требует добавления угля и 15–20 % крови для нейтрализации ингибирующих факторов среды. Для выделения микроорганизма необходима обогащённая питательная среда.

Угольный агар готовят по методу Мишулова, Шарпа и Коэна. Среда может использоваться вместо агара Борде—Жангу для выделения Bordetella pertussis и производства вакцин против Bordetella pertussis. Угольный агар с добавлением лошадиной крови также применяют для культивирования и выделения Haemophilus influenzae.

Сложность выделения Bordetella pertussis из носоглоточного секрета связана с подавлением нежелательной микрофлоры во время длительной инкубации на питательных средах. Для ограничения роста загрязняющей микрофлоры в среду можно добавлять пенициллин. Пенициллин-устойчивая флора также может вызывать загрязнение. Метициллин эффективнее пенициллина подавляет нежелательную носоглоточную микрофлору, а цефалексин эффективнее метициллина.

Основа агара с активированным углём HiVeg приготовлена с полной заменой пептона животного происхождения на растительные пептоны, что позволяет избежать рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (BSE/TSE).

Функции компонентов:

• настой HiVeg®, пептон HiVeg® и дрожжевой экстракт обеспечивают микроорганизмы необходимыми питательными веществами;
• хлорид натрия поддерживает осмотический баланс;
• растворимый крахмал и активированный уголь нейтрализуют токсичные для видов Bordetella вещества, включая жирные кислоты;
• активированный уголь оседает на дно колбы, поэтому перед разливом колбу необходимо осторожно перемешать круговыми движениями для получения однородной суспензии угля.

Чашки исследуют после 40 ч инкубации, затем осмотр проводят дважды в день. На чашках наблюдаются небольшие блестящие серовато-белые округлые колонии Bordetella с закруглёнными краями. Результаты подтверждают методом прямого флуоресцентного анализа с антителами (DFA). Для более ранней диагностики прямой флуоресцентный анализ с антителами проводят непосредственно для секрета.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам эффективности.

Методика приготовления среды

1. Взвесьте 31,25 г порошка и суспендируйте в 450 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения при частом перемешивании до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении около 0,103 МПа (15 psi) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте стерильную дефибринированную кровь в концентрации 10 % и восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки Bos (FD004).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.
8. Перед разливом осторожно вращайте колбу, чтобы активированный уголь находился во взвешенном состоянии и равномерно распределялся по среде.

Угольный агар может быть преобразован в шоколадный агар для выделения видов Haemophilus.

Сбор и обработка образцов

1. Собирайте носовые мазки на ранней стадии заболевания.
2. Помещайте мазки в пробирки с половинной концентрацией основы агара с активированным углём, дополненной 10 % об./об. лизированной дефибринированной лошадиной крови и селективной добавкой Bos (FD004).
3. Обильно инокулируйте мазки на толстый слой основы агара с активированным углём, содержащей 10 % об./об. крови и селективную добавку Bos (FD004).
4. Дополнительно может использоваться неселективная среда без FD004.
5. Верните мазок в исходную транспортную среду и храните при комнатной температуре.
6. Инкубируйте чашки при 35 °C во влажной атмосфере с относительной влажностью 60–70 % в течение не более 6 суток.
7. После использования загрязнённые материалы стерилизуйте автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: от серого до серовато-чёрного однородного сыпучего порошка.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,8%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: в чашках Петри образуется чёрный непрозрачный гель с нерастворившимися чёрными частицами.

Реакция и pH

Реакцию определяют для 6,25 % масс./об. водного раствора при 25 °C.

Реакция, pH: 7,3 ± 0,2.

Диапазон pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления стерильной дефибринированной крови и селективной добавки Bos (FD004), после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера