HiMedia MV344-500G Основа агара с активированным углем, HiVeg

Основа агара с активированным углем HiMedia MV344-500G HiVeg — сухая питательная среда на растительной основе для культивирования Bordetella pertussis. Применяется для производства вакцин и поддержания стоковых культур; состав полностью исключает компоненты животного происхождения для исключения рисков BSE/TSE.

Принцип измерения и интерпретация

Среда предназначена для выделения бактерий рода Bordetella, в частности B. pertussis (основной возбудитель коклюша), B. parapertussis, B. bronchiseptica и B. avium. Данные микроорганизмы являются облигатными аэробами и обладают низкой метаболической активностью.

Для первичного выделения B. pertussis требуется добавление активированного угля и 15–20 % крови для нейтрализации ингибирующих рост факторов. Агар с углем может использоваться как замена агара Борде-Генгу или (при добавлении конской крови) для культивирования Haemophilus influenzae.

Роль компонентов:

• Инфузия HiVeg®, пептон HiVeg® и экстракт дрожжей: обеспечивают основные питательные вещества.
• Хлорид натрия: поддерживает осмотический баланс.
• Растворимый крахмал и активированный уголь: нейтрализуют токсичные для Bordetella вещества, такие как жирные кислоты.

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 31,25 г порошка в 450 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения при постоянном перемешивании до полного растворения.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 10 % стерильной дефибринированной крови и содержимое 1 флакона селективной добавки Bos Selective Supplement (FD004).
6. Тщательно перемешайте и разлейте по стерильным чашкам Петри.

Сбор и обработка образцов

• Тип образца: мазки из носоглотки.
• Транспортировка: мазки собирают на ранней стадии заболевания и помещают в пробирки с полусильной основой агара с углем, дополненной 10 % v/v лизированной дефибринированной кровью лошади и добавкой Bos Selective Supplement (FD004).
• Посев: мазки обильно наносят на толстый слой агара с углем (10 % v/v крови и добавка FD004). Дополнительно может быть использована неселективная среда (без FD004).
• Инкубация: чашки инкубируют при 35 °C во влажной атмосфере (влажность 60–70 %) до 6 суток.

Оценка результатов

Осмотр чашек проводят через 40 часов инкубации, затем дважды в день. Колонии Bordetella выглядят как маленькие, блестящие, серовато-белые, округлые. Результаты подтверждают методом прямого иммунофлуоресцентного анализа (DFA).

Технические характеристики

Состав (г/л)

Общие параметры

• Происхождение: без компонентов животного происхождения (растительная основа HiVeg™)
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: ПНД (HDPE)
• Вес: 500 г
• Назначение: основа среды

Контроль качества

• Внешний вид: серый или серо-черный гомогенный свободнотекучий порошок.
• Желирование: плотный гель (сопоставимо с 1,8 % агаром).
• Цвет и прозрачность: черный непрозрачный гель с нерастворенными черными частицами.
• Реакция 6,25 % водного раствора (при 25 °C): pH 7,3 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при добавлении стерильной дефибринированной крови и селективной добавки Bos Selective Supplement (FD004) после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение готовой среды: 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия плотно закрывать бутылку для предотвращения комкования. Хранить в сухом проветриваемом помещении, вдали от источников воспламенения и экстремальных температур.

Ограничения и предостережения

• При разливке среды осторожно перемешивайте колбу круговыми движениями для получения однородной суспензии угля.
• Результаты посева должны быть подтверждены методом прямого иммунофлуоресцентного анализа (DFA).
• Работа с клиническими образцами требует соблюдения стандартных мер предосторожности и использования средств индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица).

Утилизация

Загрязненные материалы и использованные среды подлежат обязательному автоклавированию или сжиганию в соответствии с лабораторными протоколами по обращению с инфекционными отходами.