HiMedia MV331-500G Основа HiVeg агара Вильсона-Блэра

Питательная среда HiMedia MV331-500G Основа HiVeg агара Вильсона-Блэра — порошковая основа массой 500 г для приготовления селективной среды. Применяется с добавлением селективного реагента для выделения Salmonella Typhi из пищевых, молочных и водных образцов; хранение продукта осуществляется при 10–30 °C.

Назначение

Основа HiVeg агара Вильсона—Блэра предназначена для приготовления селективной питательной среды с добавлением 1%-ного раствора бриллиантового зелёного и селективного реагента. Среда используется для выделения Salmonella Typhi, других видов Salmonella, включая лактозоферментирующие штаммы, из пищевых и молочных продуктов, а также проб воды.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности среды.

Технические характеристики

Приготовление среды

1. Суспендируйте 60,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (ориентировочно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В стерильную расплавленную основу добавьте 4 мл 1%-ного раствора бриллиантового зелёного и 70 мл селективного реагента.
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Приготовление селективного реагента

Приготовьте каждый раствор отдельно:

• Раствор 1: 40 г сульфита натрия в 100 мл дистиллированной воды.
• Раствор 2: 21 г двузамещённого фосфата натрия в 100 мл дистиллированной воды.
• Раствор 3: 12,5 г цитрата висмута-аммония в 100 мл дистиллированной воды.
• Раствор 4: 0,96 г сульфата железа в 20 мл дистиллированной воды с добавлением 2 капель соляной кислоты.

После приготовления объедините растворы. Кипятите объединённый раствор до появления серо-сланцевого цвета. Тщательно перемешайте реагент и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Salmonella — род грамотрицательных бактерий семейства Enterobacteriaceae, часто являющихся причиной пищевых инфекций и возбудителями брюшного тифа и паратифов. Виды Salmonella выделяют от человека и животных. Известно более 2000 сероваров Salmonella, каждый из которых характеризуется определённой специфичностью к хозяину.

Человек является единственным известным природным резервуаром серовара Salmonella Typhi и сероваров Salmonella Paratyphi A, B и C. Передача микроорганизма возможна фекально-оральным путём. Бактерии выделяются человеком с фекалиями и могут передаваться через загрязнённую воду, пищу или при контакте между людьми при несоблюдении правил личной гигиены.

Агар Вильсона—Блэра, разработанный Wilson и Blair, применяется для выделения видов Salmonella, особенно Salmonella Typhi, из клинических образцов. Состав селективного реагента представляет собой модификацию висмут-сульфитного реагента, описанного Hajna и Perry. Среда особенно пригодна для выделения S. Typhi.

Среда обладает высокой селективностью в отношении Salmonella и подавляет рост колиформных бактерий, Proteus и Shigella. Отдельные штаммы колиформных бактерий могут давать тусклые зелёные или коричневые колонии, но без окружающего металлического блеска. Среда также пригодна для выделения лактозоферментирующих штаммов Salmonella, которые невозможно дифференцировать на дифференциальных средах, содержащих лактозу, поскольку лактоза не используется в этой среде как ферментируемый субстрат.

Основа агара Вильсона—Блэра HiVeg® изготовлена с использованием растительных пептонов вместо пептонов животного происхождения, поэтому не содержит рисков, связанных с BSE/TSE. Специальный пептон HiVeg® и экстракт HiVeg® обеспечивают среду азотистыми и углеродистыми соединениями, а также другими питательными веществами, необходимыми для роста микроорганизмов.

Бриллиантовый зелёный подавляет рост всех грамположительных бактерий. Декстроза является ферментируемым углеводом. Сульфат железа способствует образованию H₂S. Висмут относится к тяжёлым металлам и подавляет большинство грамотрицательных кишечных палочек, за исключением Salmonella. В присутствии сульфита висмута и декстрозы виды Salmonella восстанавливают сульфат железа с образованием сульфида железа, что проявляется появлением колоний чёрного цвета. Двузамещённый фосфат натрия эффективно буферирует среду. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие.

Типы образцов

• Пищевые продукты.
• Молочные продукты.
• Водные образцы.

Отбор и обработка образцов

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

Для водных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам и местным нормативам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры предосторожности

• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При работе с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности, установленные соответствующими руководствами.
• Требования безопасности приведены в отдельных паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Не храните приготовленную среду в холодильнике при 4 °C более 2 суток: среда изменяет цвет на зелёный, что снижает её селективность.
2. Для подтверждения результата необходимо дополнительно провести биохимические и серологические исследования.

Контроль качества

Описание порошка

• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 3,0%-ным агаровым гелем.

Приготовленная среда

• Цвет и прозрачность базовой среды: гель светло-жёлтого цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий.
• Цвет и прозрачность среды после добавления селективного реагента и 1%-ного раствора бриллиантового зелёного: в чашках Петри образуется непрозрачный гель зеленовато-жёлтого цвета.
• Реакция: реакция 6,0%-ного водного раствора при 25 °C.
• pH: 7,10–7,50.
• Конечный pH: 7,3 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации среды с добавленными 1%-ным раствором бриллиантового зелёного и селективными реагентами при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Хранение и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения сухого продукта: плотно закрытый контейнер.
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка.
• Ненадлежащее хранение может привести к образованию комков.
• Храните продукт в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования плотно закрывайте контейнер.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение установленного срока годности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов путём автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов и материалов, контактировавших с образцами, соблюдайте установленные лабораторные процедуры. Обеззараживание и утилизацию выполняйте в соответствии с действующими лабораторными методиками.