HiMedia MV331-100G Основа HiVeg агара Вильсона-Блэра

Питательная среда HiMedia MV331-100G Основа HiVeg агара Вильсона-Блэра производства HiMedia — порошковая основа для приготовления селективной среды с конечным pH 7,3 ± 0,2. Применяется с добавлением селективного реагента для выделения Salmonella Typhi из пищевых, молочных и водных проб; хранение основы — при 10–30 °C.

Назначение

Основа HiVeg агара Вильсона-Блэра используется с добавлением селективного реагента для выделения Salmonella Typhi. Среда предназначена для анализа пищевых и молочных образцов, а также проб воды.

Состав

Расчётный состав на 1 л среды:

Формула откорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Принцип действия и интерпретация

Salmonella — род грамотрицательных бактерий семейства Enterobacteriaceae, часто вызывающих пищевые инфекции и являющихся возбудителями брюшного тифа и паратифов. Виды Salmonella выделяют от людей и животных. Известно более 2000 сероваров Salmonella, каждый из которых отличается специфичностью к хозяину.

Люди являются единственным известным природным резервуаром серовара Salmonella Typhi и сероваров Salmonella Paratyphi A, B и C. Передача возбудителя возможна фекально-оральным путём; бактерии выделяются с фекалиями человека и могут распространяться через загрязнённую воду, пищу или при контакте между людьми при недостаточном соблюдении личной гигиены.

Агар Вильсона—Блэра, разработанный Wilson и Blair, рекомендован для выделения видов Salmonella, особенно Salmonella Typhi, из клинических образцов. Формула селективного реагента представляет собой модификацию бисмут-сульфитного реагента, описанного Hajna и Perry. Среда особенно подходит для выделения S. Typhi.

Среда обладает высокой селективностью в отношении Salmonella и подавляет рост колиформных бактерий, Proteus и Shigella. Отдельные штаммы колиформных бактерий могут расти с образованием тускло-зелёных или коричневых колоний, но без окружающего металлического блеска. Среда также подходит для выделения лактозоферментирующих штаммов Salmonella, которые невозможно дифференцировать на дифференциальных средах, содержащих лактозу, поскольку лактоза не является ферментируемым субстратом этой среды.

Основа агара Вильсона—Блэра HiVeg® изготовлена с использованием пептонов растительного происхождения вместо пептонов животного происхождения, благодаря чему не содержит компонентов животного происхождения и не несёт рисков, связанных с BSE/TSE. Специальный пептон HiVeg® и экстракт HiVeg® обеспечивают азотистые и углеродистые соединения, а также другие питательные вещества для роста.

Бриллиантовый зелёный подавляет все грамположительные бактерии. Декстроза является ферментируемым углеводом. Сульфат железа способствует образованию H₂S. Висмут — тяжёлый металл, подавляющий большинство грамотрицательных кишечных палочек, кроме Salmonella. В присутствии сульфита висмута и декстрозы виды Salmonella восстанавливают сульфат железа с образованием сульфида железа, что проявляется чёрной окраской колоний. Гидрофосфат динатрия эффективно буферирует среду. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 60,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (ориентировочно 0,10 МПа) при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В стерильную расплавленную основу добавьте 4 мл 1%-ного раствора бриллиантового зелёного и 70 мл селективного реагента.
6. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Приготовление селективного реагента

Приготовьте каждый раствор отдельно, затем объедините их. Кипятите объединённый раствор до появления серо-свинцовой окраски.

• Раствор 1: растворите 40 г сульфита натрия в 100 мл дистиллированной воды.
• Раствор 2: растворите 21 г гидрофосфата динатрия в 100 мл дистиллированной воды.
• Раствор 3: растворите 12,5 г цитрата висмута-аммония в 100 мл дистиллированной воды.
• Раствор 4: растворите 0,96 г сульфата железа в 20 мл дистиллированной воды с добавлением 2 капель соляной кислоты.

После кипячения объединённого раствора тщательно перемешайте реагент и разлейте в стерильные чашки Петри.

Типы образцов

• Пищевые и молочные образцы.
• Пробы воды.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам и местным нормативным требованиям.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры безопасности

Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку. При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.

При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики. При работе с образцами необходимо соблюдать стандартные меры предосторожности согласно утверждённым руководствам. Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Не храните приготовленную среду в холодильнике при 4 °C более 2 суток: среда изменяет цвет на зелёный, а её селективность снижается.
2. Для подтверждения результатов необходимо дополнительно провести биохимические и серологические исследования.

Ожидаемые характеристики

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно указаниям на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный, сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 3,0%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды:
  • базовая среда — прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-жёлтого цвета;
  • после добавления селективного реагента и 1%-ного раствора бриллиантового зелёного — в чашках Петри образуется мутный гель зеленовато-жёлтого цвета.
• Реакция: реакция 6,0%-ного водного раствора по массе при 25 °C.
• pH: 7,10–7,50.
• Конечный pH: 7,3 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления 1%-ного раствора бриллиантового зелёного и селективных реагентов, после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Технические характеристики

Хранение и срок годности

Храните порошок при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере. Приготовленную среду храните при 20–30 °C. Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрыв флакон, чтобы предотвратить образование комков вследствие гигроскопичности порошка. Неправильное хранение может привести к образованию комков. Храните продукт в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После использования плотно закрывайте контейнер. Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в пределах указанного срока годности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации