HiMedia MV314-500G Основа Tinsdale HiVeg агара

Основа питательной среды HiMedia MV314-500G Основа Tinsdale HiVeg агара производства HiMedia — порошкообразная селективная среда для выделения и дифференциации Corynebacterium diphtheriae. Применяется при исследовании мазков из зева, при этом среда не предназначена для первичного посева и требует последующего биохимического и серологического подтверждения.

Назначение

Основа Tinsdale HiVeg агара рекомендована для селективного выделения и дифференциации Corynebacterium diphtheriae. Тип образца: клинический материал, мазок из зева.

Среда изготовлена с использованием растительных пептонов вместо пептонов животного происхождения; продукт не содержит компонентов животного происхождения и не связан с рисками BSE/TSE.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заявленных параметров эффективности.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 40,67 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм и температуре 121 °C в течение 15 мин. Давление 15 фунтов на кв. дюйм соответствует приблизительно 0,103 МПа.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте селективную добавку для среды Tinsdale FD073, части A и B.
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Коринебактерии — грамположительные неподвижные неспорообразующие палочки. Клетки часто имеют булавовидную форму; для них характерны полосатость или зернистость, связанная с неравномерно окрашенными гранулами. Бактерии обычно являются аэробами или факультативными анаэробами, однако встречаются и микроаэрофильные виды.

Corynebacterium diphtheriae продуцирует мощный экзотоксин, вызывающий дифтерию у человека. В природных условиях C. diphtheriae обнаруживается в носоглотке инфицированных людей и здоровых носителей.

Известны три биотипа C. diphtheriae: mitis, intermedius и gravis. Признаки и симптомы дифтерии включают боль в горле, недомогание, головную боль и тошноту.

Среда Tinsdale была разработана для селективного выделения и дифференциации C. diphtheriae среди дифтероидов. Позднее состав был модифицирован для улучшения восстановления и дифференцирующих свойств C. diphtheriae. Основа Tinsdale HiVeg соответствует модифицированной среде Биллингса.

Образование ореола считается характерным свойством C. diphtheriae, за исключением C. ulcerans, который формирует колонии с аналогичными признаками. C. diphtheriae образует серовато-чёрные колонии, окружённые тёмно-коричневым ореолом. Дифтероиды, обычно присутствующие в верхних дыхательных путях, как правило, такие колонии не образуют.

HiVeg®™ пептон обеспечивает среду азотистыми соединениями. L-цистин и тиосульфат натрия образуют индикаторную систему для выявления H₂S. Теллурит калия, входящий в селективную добавку, подавляет рост грамотрицательных бактерий и большинства представителей нормальной микрофлоры верхних дыхательных путей.

Тёмно-коричневый ореол вокруг колонии обусловлен образованием H₂S из цистина и его взаимодействием с солью теллурита. C. ulcerans, обнаруживаемый в носоглотке, может формировать колонии, аналогичные колониям C. diphtheriae, поэтому для подтверждения необходимы дополнительные биохимические исследования.

Ограничения применения и мешающие факторы

• Не инкубируйте чашки в атмосфере, содержащей 5–10 % CO₂: это замедляет развитие характерных ореолов.
• Среда Tinsdale не подходит для первичного посева, поскольку может не поддерживать рост некоторых штаммов C. diphtheriae.
• C. ulcerans, C. pseudotuberculosis и, в редких случаях, бактерии рода Staphylococcus могут образовывать на среде характерный ореол.
• Через 18 ч инкубации некоторые микроорганизмы могут вызывать незначительное потемнение среды. Чашки следует оценивать после полного периода инкубации — через 48 ч.
• Для окончательного подтверждения необходимо провести дополнительные биохимические и серологические тесты.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.

Реакция среды

Реакция: для 4,07 % масс./об. водного раствора при 25 °C значение pH составляет 7,4 ± 0,2.

Диапазон pH: 7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 40–48 ч с добавлением добавки для выявления вирулентности дифтерии FD073, части A и части B.

• Соответствующие номера WDCM.

Хранение и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Храните порошок в плотно закрытой ёмкости.
• Приготовленную среду храните при 2–8 °C.
• Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия тщательно закрывайте флакон и храните продукт в сухом состоянии.
• Порошок гигроскопичен; при попадании влаги возможно образование комков.
• Неправильное хранение может привести к комкованию продукта.
• Храните продукт в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования плотно закрывайте ёмкость.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение указанного срока годности.

Обращение с образцами и безопасность

При работе с образцами и культурами соблюдайте