Дифференциальная питательная среда HiMedia MV299-500G Сорбитолово-железный HiVeg агар в виде порошка предназначена для идентификации и дифференциации энтеропатогенных Escherichia coli, не ферментирующих сорбитол. Среда применяется для анализа пищевых образцов; ограничение метода — необходимость подтверждения результатов дополнительными биохимическими и серологическими тестами.

Назначение

Среда рекомендована для культуральной идентификации и дифференциации энтеропатогенных Escherichia coli, не ферментирующих сорбитол.

Тип образца: пищевые образцы.

Состав

Формула на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных эксплуатационных параметров.

Принцип действия и интерпретация

Escherichia coli — наиболее часто выделяемая бактерия в клинических образцах, наиболее распространённая факультативная грамотрицательная палочка в фекалиях, наиболее частая причина инфекций мочевыводящих путей, а также распространённая причина кишечных и внекишечных инфекций. Штаммы E. coli, являющиеся основными кишечными патогенами человека, подразделяют на четыре группы:

• энтеротоксигенные E. coli (ETEC);
• энтероинвазивные E. coli (EIEC);
• E. coli, продуцирующие веротоксин (VTEC);
• энтеропатогенные E. coli (EPEC).

EPEC вызывает диарею у детей раннего возраста.

Сорбитол-железный агар — дифференциальная среда в пробирках, описанная Rappaport и Henig. Среда представляет собой модификацию железного агара Клиглера, в которой декстроза и лактоза заменены на D-сорбитол. Патогенные штаммы E. coli идентифицируют по неспособности ферментировать сорбитол и по образованию сероводорода.

Сорбитолово-железный HiVeg® агар приготовлен с использованием пептонов растительного происхождения вместо пептонов животного происхождения, поэтому среда не содержит рисков BSE/TSE, связанных с материалами животного происхождения.

Функции компонентов среды:

• экстракт HiVeg® и пептон HiVeg® № 3 обеспечивают углерод, азот, витамины и минеральные вещества, необходимые для роста микроорганизмов;
• D-сорбитол служит ферментируемым источником углеводов;
• хлорид натрия обеспечивает микроорганизмы необходимыми ионами;
• сочетание цитрата аммонийного железа и тиосульфата натрия обеспечивает выявление образования сероводорода, которое проявляется формированием чёрного окрашивания;
• феноловый красный является индикатором pH и выявляет ферментацию сорбитола с последующим образованием кислой среды.

По сравнению с железным агаром Клиглера в составе среды декстроза и лактоза заменены на D-сорбитол, а пептоны животного происхождения — на растительные пептоны HiVeg®.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 46,03 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду в пробирки.
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C в течение 15 мин. Указанное производителем давление 15 фунтов/кв. дюйм соответствует примерно 0,103 МПа.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. Оставьте пробирки охлаждаться в наклонном положении для формирования скошенной поверхности.

Подготовка и обработка образцов

Бесцветные колонии с сорбитолового HiVeg® агара (MV298) инокулируют в сорбитол-железный агар: столбик среды прокалывают, а скошенную поверхность штрихуют.

После инкубации в течение 18–24 ч свежевыделенные патогенные штаммы E. coli не вызывают ни закисления, ни почернения среды.

Микроорганизмы рода Proteus могут вызывать или не вызывать почернение среды и могут образовывать кислоту в столбике. При переносе культуры на среду для уреазного теста микроорганизмы рода Proteus дают положительную уреазную реакцию.

Обычные штаммы E. coli вызывают образование кислоты и газа в сорбитол-железном агаре. Некоторые патогенные штаммы после культивирования в лаборатории могут приобрести способность ферментировать сорбитол и образовывать кислоту.

Для последующей идентификации такие культуры переносят на железный HiVeg® агар Клиглера (MV078), трёхсахарный железный HiVeg® агар (MV021) или среду для уреазного теста.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид порошка: однородный, сыпучий, от светло-жёлтого до розового цвета.

Гелеобразование

Гель: плотный, сопоставимый с 2,0%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенного агара образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.

Реакция среды

Реакция 4,6%-ного водного раствора при 25 °C: pH 7,6 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,40–7,80.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее организм был известен как Enterobacter aerogenes.

† Ранее организм был известен как Proteus vulgaris.

Ограничения метода

Для подтверждения результатов необходимо выполнить дополнительные биохимические и серологические тесты.

Ожидаемые характеристики

Рабочие характеристики среды ожидаются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке и в пределах срока годности при хранении при рекомендованной температуре.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• У