HiMedia MV267-500G Основа микоплазменного HiVeg бульона без CV

Основа питательной среды HiMedia MV267-500G Основа микоплазменного HiVeg бульона без CV — порошкообразная среда типа HiVeg™ в упаковке HDPE, не содержащая компонентов животного происхождения. Предназначена для обогащения культур Mycoplasma из фармацевтических образцов; для восстановления различных видов требуется инкубация в атмосфере с 5–10 % CO₂ и наблюдение в течение до 3 недель.

Назначение

Продукт рекомендуется использовать с добавлением обогащающих компонентов как базовую жидкую питательную среду для обогащения видов Mycoplasma — микроорганизмов, ранее обозначавшихся как организмы, подобные возбудителю плевропневмонии (PPLO).

Тип образца: фармацевтические образцы.

Состав

Состав рассчитан на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров рабочих характеристик.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 21,0 г порошка в 700 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 300 мл конской сыворотки RM1239.
6. Если в качестве селективного агента используется кристаллический фиолетовый, добавьте вместо конской сыворотки RM1239 асцитическую жидкость.
7. При необходимости добавьте вместо конской сыворотки 10 флаконов обогащающей добавки HPYT (FD075).
8. Тщательно перемешайте среду.
9. Асептически разлейте приготовленную среду в стерильные пробирки или колбы в необходимом объёме.

Принцип действия и интерпретация

Бульон PPLO без кристаллического фиолетового приготовлен по формуле, описанной Morton и Lecce. Кристаллический фиолетовый исключён из состава из-за ингибирующего действия на некоторые виды Mycoplasma.

Среда используется для культивирования Mycoplasma в исследовательских целях. Компоненты среды и все добавляемые обогащающие компоненты должны быть свободны даже от небольших количеств токсичных веществ. Для хорошего роста многим видам Mycoplasma требуется сыворотка; антибиотик необходим для предотвращения роста контаминирующих микроорганизмов.

Большинство видов Mycoplasma являются аэробными или факультативно-анаэробными, однако некоторые виды относятся к микроаэрофильным. Отдельные анаэробные сапрофитные виды Mycoplasma лучше растут при 22–35 °C, тогда как патогенные штаммы растут при 35 °C.

Основа микоплазменного HiVeg бульона без CV, также обозначаемая как основа PPLO HiVeg бульона без CV, содержит растительные пептоны вместо пептонов животного происхождения, благодаря чему среда не связана с рисками BSE/TSE — губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота и трансмиссивных губчатых энцефалопатий.

Пробирки следует инкубировать в атмосфере, содержащей 5–10 % CO₂, и исследовать после 48 ч инкубации. Пробирки не следует считать отрицательными и утилизировать ранее чем через 3 недели инкубации.

После пересева на чашки с основой PPLO HiVeg бульона без CV возможные культуры в бульоне образуют колонии с типичной морфологией, напоминающей «жареное яйцо».

Технические характеристики

• Назначение изделия: основа питательной среды
• Масса: 500 г
• Температура хранения: 10–30 °C

Условия культивирования

Для оптимального восстановления микроорганизмов необходимо учитывать газовую среду и температурные требования конкретного вида Mycoplasma:

• Атмосфера инкубации: 5–10 % CO₂
• Температура для отдельных анаэробных сапрофитных видов: 22–35 °C
• Температура для патогенных штаммов: 35 °C
• Первичное время наблюдения: 48 ч
• Максимальный срок, до которого не следует браковать культуру как отрицательную: 3 недели

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: прозрачный раствор жёлтого цвета в пробирках.

Реакция среды

Реакция 2,1 % водного раствора по массе при 25 °C:

• pH: 7,8 ± 0,2

Диапазон pH: 7,60–8,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в присутствии 10 % CO₂, с добавлением 1 % конской сыворотки RM1239 и обогащающей добавки HPYT (FD075), после инкубации при 22–35 °C в течение 48 ч.

Ограничения применения

1. Виды Mycoplasma являются аэробными или факультативно-анаэробными, однако некоторые виды относятся к микроаэрофильным; для оптимального восстановления необходимо обеспечить соответствующие условия инкубации.
2. Отдельные анаэробные сапрофитные виды Mycoplasma лучше растут при 22–35 °C, тогда как патогенные штаммы растут при 35 °C; температурный режим должен поддерживаться в соответствии с культивируемым видом.
3. Среда имеет высокую степень обогащения, поэтому при приготовлении и инокуляции необходимо предотвращать контаминацию.

Хранение и срок годности

• Закрытый контейнер хранить при температуре 10–30 °C.
• Приготовленную среду хранить при 2–8 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия хранить продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывать контейнер.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение указанного срока годности.

Обращение с образцами и меры предосторожности

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку. При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица. Соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы при обращении с образцами и культурами. При работе с образцами необходимо соблюдать стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами. Дополнительные требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопас