HiMedia MV266-500G Основа микоплазменного HiVeg агара (PPLO HiVeg)

Основа питательной среды HiMedia MV266-500G Основа микоплазменного HiVeg агара (PPLO HiVeg) — сухой порошковый препарат без компонентов животного происхождения с конечным pH 7,8 ± 0,2. Применяется для выделения и культивирования видов Mycoplasma с использованием сыворотки или обогащающей добавки в атмосфере, содержащей 5–10 % CO₂.

Назначение

Основа рекомендована для выделения и культивирования видов Mycoplasma — плевропневмониеподобных организмов (PPLO). Тип образцов: фармацевтические образцы.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 36,0 г порошка в 700 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов силы/дюйм² (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 300 мл сыворотки лошади (RM1239) или содержимое 10 флаконов обогащающей добавки HPYT (FD075).
6. Тщательно перемешайте перед разливом.

Вместо сыворотки лошади допускается использовать 25 % асцитической жидкости.

Принцип действия и интерпретация

Агар PPLO был описан Мортоном, Смитом и Леберманом и применялся для изучения требований к росту Mycoplasma, а также для идентификации и культивирования этих микроорганизмов. Дополнительные сведения о Mycoplasma и методах культивирования описаны в работах Сабина, Хейфлика и других исследователей.

Основа PPLO HiVeg® приготовлена с использованием пептонов растительного происхождения вместо пептонов животного происхождения, благодаря чему продукт не содержит компонентов животного происхождения и не связан с рисками BSE/TSE.

Для культивирования Mycoplasma компоненты среды и все добавки не должны содержать токсичных веществ даже в малых количествах. Настой HiVeg® и пептон HiVeg® обеспечивают среду источниками азота и углерода, аминокислотами с длинной цепью, витаминами и другими необходимыми питательными веществами. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс среды.

Для хорошего роста многим видам Mycoplasma необходима сыворотка; антибиотик также требуется для предотвращения роста контаминирующих микроорганизмов. Большинство видов Mycoplasma являются аэробными или факультативно-анаэробными, однако некоторые виды относятся к микроаэрофильным.

Некоторые сапрофитные анаэробные виды Mycoplasma лучше всего растут при 22–35 °C, тогда как патогенные штаммы растут при 35 °C. При росте в агаровой среде Mycoplasma формирует типичную морфологию: колонии располагаются ниже поверхности агара и не растут без сыворотки.

Чашки или пробирки следует инкубировать в атмосфере, содержащей 5–10 % углекислого газа. Первичное исследование проводят после 48 ч инкубации, однако посевы нельзя считать отрицательными и утилизировать ранее чем через 3 недели инкубации.

Колонии PPLO на агаре имеют округлую форму с плотным центром и менее плотной периферией, напоминая «яичницу-глазунью». На периферии видны вакуоли — крупные образования, характерные для видов Mycoplasma. Диаметр колоний составляет 10–500 мкм (0,01–0,5 мм); колонии проникают в толщу среды.

Технические характеристики

• Наименование: основа микоплазменного HiVeg агара, PPLO HiVeg Agar Base
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Производитель: HiMedia
• Артикул: MV266-500G
• Масса: 500 г
• Физическая форма: порошок
• Происхождение компонентов: без компонентов животного происхождения, растительная основа
• Тип продукта: HiVeg™
• Тип упаковки: HDPE (полиэтилен высокой плотности)
• Конечный pH при 25 °C: 7,8 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,60–8,00
• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C

Требования к инкубации

• Атмосфера: 5–10 % CO₂
• Температура инкубации для культуральных характеристик: 22–35 °C
• Время инкубации для первичного исследования: 48 ч
• Минимальное время до признания посева отрицательным: 3 недели
• Для сапрофитных анаэробных видов Mycoplasma: оптимальный диапазон 22–35 °C
• Для патогенных штаммов: 35 °C

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, свободно текучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель жёлтого цвета.

Реакция среды

Реакцию определяют для водного раствора с концентрацией 3,6 % масс./об. при 25 °C.

• pH: 7,8 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,60–8,00

Культуральные характеристики

Характеристики определяют в присутствии 10 % углекислого газа с добавлением 1 % сыворотки лошади (RM1239) или 10 флаконов обогащающей добавки HPYT (FD075) после инкубации при 22–35 °C в течение 48 ч.

Ограничения применения

• Виды Mycoplasma являются аэробными или факультативно-анаэробными, однако некоторые виды требуют микроаэрофильных условий, поэтому для оптимального выделения необходимо обеспечить соответствующую атмосферу инкубации.
• Некоторые сапрофитные анаэробные виды Mycoplasma лучше всего растут при 22–35 °C, а патогенные штаммы — при 35 °C; рабочие условия должны поддерживаться в соответствии с культивируемым организмом.
• Из-за высокой степени обогащения среды при посеве необходимо принимать меры для предотвращения контаминации.
• Многие виды Mycoplasma не растут без сыворотки.
• Для предотвращения роста контаминирующих микроорганизмов может потребоваться добавление антибиотика.

Условия хранения и срок годности

Храните сухой продукт в плотно закрытом контейнере при 10–30 °C, а приготовленную среду — при 2–8 °C. Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности порошка. Неправильное хранение может привести к комкованию. Х