HiMedia MV266-100G Основа микоплазменного HiVeg агара (PPLO HiVeg)

Основа микоплазменного HiVeg агара (PPLO HiVeg) HiMedia MV266-100G для изоляции и культивирования видов Mycoplasma (PPLO). Применяется для анализа фармацевтических образцов; состав разработан на основе растительных пептонов для исключения рисков BSE/TSE.

Принцип измерения

Среда PPLO HiVeg® Agar Base предназначена для выращивания микоплазм, которые характеризуются отсутствием клеточной стенки и требуют специфических питательных компонентов. Растительный настой (HiVeg® infusion) и растительный пептон (HiVeg® peptone) служат источниками азота, углерода, длинноцепочечных аминокислот, витаминов и других необходимых нутриентов. Хлорид натрия обеспечивает осмотический баланс.

Для полноценного роста микоплазм в среду необходимо добавлять сыворотку или специализированные добавки, так как без них данные микроорганизмы не растут. Многие виды микоплазм являются аэробными или факультативно-анаэробными, некоторые — микроаэрофильными.

Методика приготовления и использования

Приготовление среды

1. Суспендируйте 36,0 г порошка в 700 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. Асептически добавьте 300 мл сыворотки лошади (RM1239) или 10 флаконов добавки HPYT Enrichment Supplement (FD075).
6. Тщательно перемешайте перед розливом. Примечание: вместо сыворотки лошади можно использовать 25 % асцитическую жидкость.

Инкубация и интерпретация результатов

• Условия: Чашки или пробирки следует инкубировать в атмосфере с содержанием 5–10 % CO₂.
• Температурный режим: Сапрофитные анаэробные микоплазмы лучше растут при 22–35 °C, патогенные штаммы — при 35 °C.
• Сроки: Первичный осмотр проводится через 48 часов, однако среду нельзя считать отрицательной до истечения 3 недель инкубации.
• Морфология: Колонии PPLO имеют круглую форму с плотным центром и менее плотной периферией, напоминая «яичницу» (fried egg). В периферической части видны вакуоли — крупные тельца, характерные для видов Mycoplasma. Диаметр колоний варьируется от 10 до 500 мкм (0,01–0,5 мм), они проникают вглубь среды.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Общие параметры

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободнотекущий порошок от кремового до желтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаром.
• Цвет и прозрачность: желтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
• Реакция: pH 7,8 $\pm$ 0,2 для 3,6 % (масса/объем) водного раствора при 25 °C.
• Диапазон pH: 7,60–8,00.

Культуральные характеристики

Характеристики определены при инкубации в присутствии 10 % CO₂ с добавлением 1 % сыворотки лошади (RM1239) или 10 флаконов добавки HPYT Enrichment Supplement (FD075) при температуре 22–35 °C в течение 48 часов.

Область применения и ограничения

Применяется для анализа фармацевтических образцов.

Ограничения:

• Для оптимального восстановления микроорганизмов необходимо строго соблюдать условия инкубации (в зависимости от типа микоплазм: аэробные, факультативно-анаэробные или микроаэрофильные).
• Требуется точное поддержание температуры (22–35 °C для сапрофитов, 35 °C для патогенов).
• Из-за высокого содержания питательных веществ среда склонна к контаминации; при инокуляции соблюдать строгую стерильность.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре от +10 до +30 °C. Из-за гигроскопичности продукта после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.
• Хранение готовой среды: при температуре от +2 до +8 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.

Меры предосторожности и утилизация

• Безопасность: использовать защитные перчатки, одежду, средства защиты глаз и лица. Соблюдать правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• Утилизация: все загрязненные материалы и использованные среды должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией в соответствии с установленными лабораторными процедурами.