HiMedia MV266-100G Основа микоплазменного HiVeg агара (PPLO HiVeg)

Порошкообразная питательная среда HiMedia MV266-100G Основа микоплазменного HiVeg агара (PPLO HiVeg) растительного происхождения с конечным pH 7,8 ± 0,2. Основа предназначена для выделения и культивирования видов Mycoplasma; перед использованием раствор требует добавления лошадиной сыворотки или обогащающей добавки HPYT и последующей инкубации в атмосфере с 5–10 % CO₂.

Назначение

Основа микоплазменного HiVeg-агара применяется для выделения и культивирования видов Mycoplasma — плевропневмониеподобных организмов (PPLO). Тип образца: фармацевтические образцы.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 36,0 г порошка в 700 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 300 мл лошадиной сыворотки RM1239 или 10 флаконов обогащающей добавки HPYT FD075.
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду.

Вместо лошадиной сыворотки допускается использовать 25 % асцитической жидкости.

Принцип действия и интерпретация

Агар PPLO описан Morton, Smith и Leberman и применялся для изучения требований к росту, идентификации и культивированию Mycoplasma. Сведения о Mycoplasma и методах культивирования этих организмов приведены в работах Sabin, Hayflick и других исследователей.

Основа агара PPLO HiVeg® изготовлена с использованием пептонов растительного происхождения вместо пептонов животного происхождения. Такой состав не содержит компонентов животного происхождения и не связан с рисками BSE/TSE.

Для культивирования Mycoplasma компоненты среды и все добавляемые обогащающие вещества не должны содержать токсичных примесей даже в следовых количествах. Настой HiVeg® и пептон HiVeg® обеспечивают источники азота и углерода, аминокислоты с длинной цепью, витамины и другие необходимые питательные вещества. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс среды.

Многие виды Mycoplasma требуют сыворотки для полноценного роста; для предотвращения развития загрязняющих микроорганизмов необходимо также присутствие антибиотика. Большинство видов Mycoplasma являются аэробными или факультативно-анаэробными, однако некоторые виды относятся к микроаэрофильным.

Некоторые анаэробные сапрофитные виды Mycoplasma лучше растут при 22–35 °C, тогда как патогенные штаммы растут при 35 °C. При росте в агаризованной среде Mycoplasma формируют типичную морфологию: колонии располагаются ниже поверхности агара и не развиваются без сыворотки.

Чашки или пробирки следует инкубировать в атмосфере, содержащей 5–10 % углекислого газа, и исследовать через 48 ч инкубации. Не следует считать образцы отрицательными и утилизировать их ранее чем через 3 недели инкубации.

Колонии PPLO на агаре PPLO имеют круглую форму с плотным центром и менее плотной периферией, напоминающей «яичницу-глазунью». На периферии наблюдаются вакуоли — крупные образования, характерные для видов Mycoplasma. Диаметр колоний составляет от 10 до 500 мкм (0,01–0,5 мм); колонии проникают в толщу среды.

Культуральные характеристики

Характеристики определяли при наличии 10 % углекислого газа и после добавления 1 % лошадиной сыворотки RM1239 или 10 флаконов обогащающей добавки HPYT FD075; инкубация проводилась при 22–35 °C в течение 48 ч.

Технические характеристики

• Назначение изделия: основа
• Масса: 100 г
• Конечный pH при 25 °C: 7,8 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,60–8,00
• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C

Контроль качества

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется жёлтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
• Реакция: реакция 3,6%-ного водного раствора при 25 °C; pH 7,8 ± 0,2.
• pH: 7,60–8,00.

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Условия хранения и срок годности

Храните сухой продукт в плотно закрытой ёмкости при температуре 10–30 °C, а приготовленную среду — при 2–8 °C. Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде. Порошок гигроскопичен; при поглощении влаги возможно образование комков. Неправильное хранение может привести к комкованию.

Храните продукт в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После каждого использования плотно закрывайте ёмкость. Рабочие характеристики продукта сохраняются лучше всего при использовании в течение установленного срока годности.

Ограничения применения

• Виды Mycoplasma могут быть аэробными, факультативно-анаэробными или микроаэрофильными, поэтому для оптимального выделения необходимо обеспечить соответствующую атмосферу инкубации.
• Некоторые анаэробные сапрофитные виды Mycoplasma лучше растут при 22–35 °C, тогда как патогенные штаммы растут при 35 °C; условия культивирования должны поддерживаться в соответствии с исследуемым организмом.
• Из-за высокой степени обогащения среды при посеве необходимо принимать меры для предотвращения загрязнения.
• Для полноценного роста многих видов Mycoplasma требуется сыворотка.
• Для подавления роста загрязняющих микроорганизмов необходимо наличие антибиотика.
• Колонии не следует признавать отрицательными до истечения 3 недель инкубации, даже если через 48 ч роста не обнаружено.

Безопасность и обращение

Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку. При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.

При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики. При работе с клиническими образцами необходимо соблюдать стандартные меры предосторожности в соответствии с действующими руководствами. Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Стерилизация и утилизация

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов путём автоклавирования и/или сжигания. Материалы, контактировавшие с образцами, необходимо обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными процедурами обращения с инфекционными материалами.

Отличие состава

В основе PPLO HiVeg® используются пептоны растительного происхождения вместо пептонов животного происхождения; физическая форма продукта — порошок, упаковка выполнена из полиэтилена высокой плотности (HDPE).