HiMedia MV239-500G Основа HiVeg среды для лептоспир Флетчера

Основа питательной среды HiMedia MV239-500G HiVeg для лептоспир Флетчера (HiVeg Medium Base Fletcher) предназначена для изоляции, культивирования и поддержания видов Leptospira. При добавлении сыворотки используется для выделения лептоспир из крови, мочи и образцов почек; вес упаковки составляет 500 г.

Принцип измерения и интерпретация

Лептоспиры представлены как свободноживущими, так и паразитическими формами (патогенные виды определяются как Leptospira interrogans). Из-за малого размера микроорганизмы трудно обнаруживаются в нативных препаратах свежей крови. Наиболее надежным методом лабораторной диагностики лептоспироза является культивирование возбудителя из крови или спинномозговой жидкости в первую неделю заболевания, либо из мочи в течение нескольких последующих месяцев.

Среда содержит растительный пептон (HiVeg™ peptone) и растительный экстракт (HiVeg™ extract), обеспечивающие необходимые питательные вещества. Хлорид натрия поставляет основные ионы, а добавка-обогатитель (сыворотка) служит источником углерода, витаминов и энергии. Низкая концентрация агара позволяет регистрировать подвижность микроорганизмов. Использование растительных компонентов вместо животных делает среду безопасной с точки зрения рисков БЭЗ/ТСЭ (губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота / трансмиссивных спонгиформных энцефалопатий).

Добавление кроличьей сыворотки обеспечивает присутствие нативного гемоглобина, который совместно с тиамином стимулирует рост лептоспир.

Оценка роста

Проверку пробирок на наличие роста следует проводить каждые 5–7 дней. Рост проявляется в виде кольцевидной зоны (диска) на глубине 1–3 см ниже поверхности среды. Отсутствие кольцевой зоны не всегда означает отсутствие лептоспир. Для микроскопического исследования необходимо взять небольшое количество материала из зоны диска (окрашивание по Граму не является удовлетворительным). Микроколонии можно фиксировать метанолом и окрашивать по Гимзе для визуализации палочковидных форм. При исследовании в темном поле лептоспиры демонстрируют характерную «штопорообразную» подвижность.

Состав

Состав, г/л:

Методика приготовления и использования

1. Смешайте 2,5 г порошка с 920 мл очищенной или дистиллированной воды (объем воды должен быть скорректирован с учетом последующего добавления обогатителя).
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈ 0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 80 мл стерильного обогатителя для лептоспир (кроличья или лошадиная сыворотка RM1239), чтобы довести конечный объем до 1 литра.

Посев и инкубация

В среду Флетчера инокулируют несколько капель крови с гепарином или хлоридом натрия в качестве антикоагулянта. Все культуры инкубируют при комнатной температуре в темноте на срок до 6 недель.

Технические характеристики

• Внешний вид: белый или желтый гомогенный свободнотекущий порошок
• Желирование: полутвердый гель, сопоставим с 0,15% агаровым гелем
• Цвет и прозрачность готовой среды: очень светло-желтый, слегка опалесцирующий гель в пробирках
• Реакция 0,25% (масса/объем) водного раствора при 25 °C: pH 7,9 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,70–8,10
• Температура хранения: 10–30 °C
• Температура хранения готовой среды: 20–30 °C

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при добавлении стерильного обогатителя (кроличья/лошадиная сыворотка RM1239) после инкубации при 30–32 °C в течение 5 дней.

Дополнительные спецификации

Ограничения и меры предосторожности

• Ограничения: Поскольку выделение Leptospira может происходить спорадически, посев последовательных образцов с интервалом не менее 1 суток повышает вероятность получения положительного результата.
• Меры предосторожности: При работе с образцами и культурами следует соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности. Использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица.
• Утилизация: Загрязненные материалы и использованные среды должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией.

Условия эксплуатации и хранения

Хранить в плотно закрытом контейнере в сухом вентилируемом помещении, защищенном от экстремальных температур и источников возгорания. Из-за гигроскопичности продукта после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать во избежание образования комков.