HiMedia MV239-500G Основа HiVeg среды для лептоспир Флетчера

Питательная среда HiMedia MV239-500G Основа HiVeg среды для лептоспир Флетчера производства HiMedia — порошкообразная основа массой 500 г для приготовления среды с добавлением сыворотки. Питательная среда предназначена для выделения, культивирования и поддержания видов Leptospira; температура хранения продукта составляет 10–30 °C.

Назначение

С добавлением сыворотки основу применяют для выделения, культивирования и поддержания видов Leptospira. Среда Флетчера предназначена для выделения Leptospira из образцов крови, мочи и почечной ткани.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами рабочих характеристик.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 2,5 г порошка в 920 мл очищенной или дистиллированной воды. Объём воды выбирают с учётом последующего добавления обогащающей добавки.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 psi (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 80 мл стерильной обогащающей добавки для лептоспир — кроличьей или лошадиной сыворотки RM1239, доведя конечный объём до 1 л.

Принцип действия и интерпретация

Лептоспиры включают свободноживущие и паразитические формы. Патогенные виды называют Leptospira interrogans. Организмы слишком малы для наблюдения в препаратах свежей крови во влажной капле.

Наиболее надёжный лабораторный метод диагностики лептоспироза — культивирование возбудителя из крови или спинномозговой жидкости в течение первой недели заболевания либо из мочи в последующие несколько месяцев. Несколько капель крови с гепарином или с антикоагулянтом на основе хлорида натрия инокулируют в среду Флетчера.

Основа среды Флетчера для лептоспир приготовлена по рецептуре Флетчера и используется для выделения Leptospira из крови, мочи и образцов почечной ткани. Все культуры инкубируют в темноте при комнатной температуре до 6 недель. Организмы растут ниже поверхности среды.

Материал отбирают на несколько сантиметров ниже поверхности бульонной культуры и еженедельно исследуют на наличие роста методом прямого влажного препарата в тёмнопольном освещении. Лептоспиры демонстрируют подвижность, напоминающую движение штопора.

Пептон HiVeg®™ и экстракт HiVeg®™ обеспечивают питательные вещества, необходимые для роста бактерий. Хлорид натрия обеспечивает поступление необходимых ионов. Обогащающая добавка содержит источники углерода, витамины и источники энергии, необходимые для роста Leptospira. Низкая концентрация агара облегчает выявление подвижности.

Основа среды Флетчера для лептоспир HiVeg®™ приготовлена с использованием пептонов растительного происхождения вместо пептонов животного происхождения, что исключает риски BSE/TSE. Среду для лептоспир обогащают добавлением кроличьей сыворотки. Кроличья сыворотка содержит нативный гемоглобин, который совместно с тиамином способствует росту лептоспир.

Пробирки исследуют на наличие роста каждые 5–7 дней. Рост появляется в виде кольцевидной зоны или диска на глубине 1–3 см ниже поверхности среды. Отсутствие кольцевидной зоны роста не обязательно означает отсутствие лептоспир. Небольшое количество материала из зоны диска извлекают и исследуют микроскопически; окрашивание по Граму для этой цели неудовлетворительно. Микроколонии можно фиксировать метанолом и окрашивать по Гимзе для выявления палочковидных форм.

Требования к образцам

В описании производителя конкретные типы образцов не указаны. Для среды предусмотрено исследование крови, спинномозговой жидкости, мочи и образцов почечной ткани в соответствии с назначением методики.

Обращение с образцами и утилизация

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания. Лабораторные процедуры утилизации инфекционных материалов должны соблюдаться в установленном порядке. Материалы, контактировавшие с образцом, необходимо обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Меры предосторожности

• Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с утверждёнными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения метода

1. Последовательное исследование образцов, полученных с интервалом не менее 1 суток, повышает вероятность получения положительной культуры, поскольку выделение Leptospira может происходить периодически.

Контроль качества

Внешний вид

Белый или жёлтый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Полужидкая среда, сопоставимая с 0,15%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках образуется гель очень светло-жёлтого цвета, слегка опалесцирующий.

Реакция среды

Реакция 0,25%-ного водного раствора по массе при 25 °C: pH 7,9 ± 0,2.

Диапазон pH

7,70–8,10.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления стерильной обогащающей добавки для лептоспир — кроличьей или лошадиной сыворотки RM1239 — и инкубации при 30–32 °C в течение 5 суток.

Технические характеристики

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения продукта в плотно закрытом контейнере: 10–30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия хранить продукт в сухом виде, плотно закрыв флакон, чтобы предотвратить образование комков вследствие гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования плотно закрывать контейнер.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение установленного срока годности.