HiMedia MV239-100G Основа HiVeg среды для лептоспир Флетчера

Основа питательной среды HiMedia MV239-100G Основа HiVeg среды для лептоспир Флетчера выпускается в виде порошка. Применяется с добавлением сыворотки для выделения, культивирования и поддержания культур видов Leptospira; конечное значение pH составляет 7,9 ± 0,2.

Назначение

Препарат предназначен для приготовления среды Флетчера с последующим добавлением обогащающей добавки — стерильной кроличьей или лошадиной сыворотки RM1239. Среда используется для выделения, культивирования и поддержания видов Leptospira из образцов крови, мочи и почечной ткани.

Состав

Состав на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с установленными параметрами эффективности.

Методика приготовления среды

1. Взвесьте 2,5 г порошка и суспендируйте в 920 мл очищенной или дистиллированной воды. Объём воды должен учитывать последующее добавление обогащающей добавки.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 80 мл стерильной обогащающей добавки для лептоспир — кроличьей или лошадиной сыворотки RM1239 — до получения конечного объёма 1 л.

Принцип действия и интерпретация

Лептоспиры включают свободноживущие и паразитические формы. Патогенные виды относятся к Leptospira interrogans. Организмы имеют настолько малый размер, что не обнаруживаются в нативных препаратах свежей крови.

Наиболее надёжный лабораторный способ диагностики лептоспироза — культивирование возбудителя из крови в течение первой недели заболевания или из спинномозговой жидкости, а затем из мочи, в которой лептоспиры могут выделяться в течение нескольких месяцев. Несколько капель крови, стабилизированной гепарином или антикоагулянтом на основе хлорида натрия, вносят в среду Флетчера.

Основа среды Флетчера для лептоспир приготовлена по рецептуре Флетчера и используется для выделения Leptospira из крови, мочи и образцов почечной ткани.

Все посевы инкубируют в тёмном месте при комнатной температуре до 6 недель. Организмы растут ниже поверхности среды. Материал забирают на несколько сантиметров ниже поверхности бульонной культуры и еженедельно исследуют на наличие роста методом прямого исследования нативного препарата в тёмном поле. Для лептоспир характерна винтообразная подвижность.

Пептон и экстракт HiVeg®™ обеспечивают питательные вещества, необходимые для роста бактерий. Хлорид натрия служит источником необходимых ионов. Обогащающая добавка поставляет углерод, витамины и источники энергии, необходимые для роста Leptospira. Низкая концентрация агара облегчает обнаружение подвижности.

В основе Флетчера для лептоспир используются пептоны растительного происхождения вместо пептонов животного происхождения, поэтому среда не связана с рисками BSE/TSE. Основа среды для лептоспир обогащается добавлением кроличьей сыворотки. Кроличья сыворотка содержит природный гемоглобин, который совместно с тиамином поддерживает рост лептоспир.

Пробирки проверяют на наличие роста каждые 5–7 дней. Рост формируется в виде кольцевой зоны — диска — на расстоянии 1–3 см ниже поверхности среды. Отсутствие кольцевой зоны не означает, что лептоспиры отсутствуют. Небольшое количество материала из области диска извлекают и исследуют микроскопически; окраска по Граму для этой цели неудовлетворительна. Микроколонии можно фиксировать метанолом и окрашивать по Гимзе для выявления палочковидных форм.

От сред на основе пептонов животного происхождения продукт отличается использованием растительных пептонов HiVeg®™ и экстракта HiVeg®™.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления стерильной обогащающей добавки для лептоспир — кроличьей или лошадиной сыворотки RM1239 — и инкубации при 30–32 °C в течение 5 суток.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от белого до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Полужидкая среда, сопоставимая с гелем, содержащим 0,15 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках образуется гель очень светло-жёлтого цвета, слегка опалесцирующий.

Реакция среды

Реакцию определяют для водного раствора с концентрацией 0,25 % масс./об. при 25 °C.

• pH: 7,9 ± 0,2

Диапазон pH

• pH: 7,70–8,10

Тип образца

В исходных данных производителя конкретный тип образца не указан. В описании применения предусмотрены образцы крови, спинномозговой жидкости, мочи и почечной ткани.

Обращение с образцами и их обеззараживание

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения метода

1. Последовательный посев образцов, взятых с интервалом не менее 1 суток, повышает вероятность получения положительной культуры, поскольку Leptospira может выделяться периодически.

Меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку.