HiMedia MV239-100G Основа HiVeg среды для лептоспир Флетчера

Основа HiVeg среды для лептоспир Флетчера HiMedia MV239-100G представляет собой сухую питательную среду на растительной основе для изоляции и культивирования видов Leptospira. При добавлении сыворотки используется для выделения лептоспир из крови, мочи и образцов тканей почек; вес упаковки составляет 100 г.

Принцип измерения

Лептоспиры представлены как свободноживущими, так и паразитическими формами (патогенные виды обозначаются как Leptospira interrogans). Из-за малого размера микроорганизмы трудно обнаружимы в свежих мазках крови, поэтому наиболее надежным методом диагностики лептоспироза является культивирование возбудителя из крови или спинномозговой жидкости (в первую неделю болезни) или из мочи (в течение нескольких месяцев после заболевания).

Среда содержит растительный пептон HiVeg™ и экстракт HiVeg™, обеспечивающие необходимые питательные вещества для роста бактерий. Хлорид натрия обеспечивает поступление основных ионов. Добавка-обогатитель (сыворотка) служит источником углерода, витаминов и энергии. Низкая концентрация агара позволяет регистрировать подвижность микроорганизмов. Использование растительных компонентов вместо животных делает среду безопасной (отсутствие рисков BSE/TSE).

Методика приготовления и анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 2,5 г порошка в 920 мл очищенной или дистиллированной воды (объем воды должен быть подобран с учетом последующего добавления обогатителя).
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C и давлении $\approx$0,1 МПа (15 lbs pressure) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 80 мл стерильного обогатителя для лептоспир (кроличья или лошадиная сыворотка RM1239), чтобы довести конечный объем до 1 литра.

Процедура анализа и интерпретация

1. Внесите несколько капель крови с гепарином или цитратом натрия в среду Флетчера.
2. Инкубируйте культуры при комнатной температуре в темноте до 6 недель.
3. Организмы растут ниже поверхности среды. Еженедельно исследуйте материал, взятый с глубины нескольких сантиметров от поверхности, с помощью прямой «мокрой» пробы под темнопольным микроскопом. Лептоспиры проявляют характерную штопорообразную подвижность.
4. Проверяйте пробирки на наличие роста каждые 5–7 дней. Рост проявляется в виде кольцевой зоны (диска) на глубине 1–3 см от поверхности.
5. Отберите небольшое количество материала из зоны диска для микроскопии (окрашивание по Грамму неэффективно). Микроколонии можно зафиксировать метанолом и окрасить по Гимзе для визуализации палочковидных форм.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Общие параметры

Контроль качества

• Внешний вид: белый или желтый гомогенный свободнотекучий порошок.
• Желирование: полутвердый гель, сопоставимый с 0,15% агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность: очень светло-желтый, слегка опалесцирующий гель в пробирках.
• Реакция: pH 0,25% (масса/объем) водного раствора при 25 °C составляет 7,9 $\pm$ 0,2.
• Диапазон pH: 7,70–8,10.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при добавлении стерильного обогатителя для лептоспир (кроличья/лошадиная сыворотка RM1239) после инкубации при 30–32 °C в течение 5 суток.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, защищенном от экстремальных температур и источников возгорания.

Ограничения и меры предосторожности

• Ограничения: из-за спорадического выделения Leptospira рекомендуется культивировать последовательные образцы с интервалом не менее 1 суток для повышения вероятности получения положительного результата.
• Меры безопасности: использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица. Соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности при работе с образцами.
• Утилизация: загрязненные материалы и использованные среды подлежат обязательной стерилизации в автоклаве или сжиганию перед утилизацией.