HiMedia MV179-500G Основа олеинового HiVeg агара Дюбо

Питательная среда HiMedia MV179-500G Основа олеинового HiVeg агара Дюбо — сухая основа для приготовления плотных агаризованных сред для культивирования микобактерий. Применяется при посеве клинических образцов, включая мокроту, с добавлением стерильной олеиново-альбуминовой добавки и пенициллина; готовую среду хранят при 2–8 °C.

Назначение

Основа олеинового HiVeg агара Дюбо предназначена для приготовления плотной агаризованной питательной среды для культивирования микобактерий в чашках Петри или пробирках.

Тип образца: клинические образцы, включая мокроту.

Происхождение пептонов: растительное, без компонентов животного происхождения.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 4 г сухой основы в 180 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении около 0,103 МПа (15 фунтов давления) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте к 180 мл стерильной охлаждённой среды 20 мл стерильной олеиново-альбуминовой добавки FD020 и 5 000–10 000 единиц пенициллина.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте приготовленную среду в стерильные пробирки или чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Возбудитель туберкулёза у человека, Mycobacterium tuberculosis, переносится воздушными частицами — капельными ядрами, образующимися при кашле пациентов с лёгочным туберкулёзом. Заражение происходит при вдыхании восприимчивым человеком капельных ядер, содержащих бактерии.

Микобактерии обычно выделяют на средах, в которых основой служит коагулированное яйцо или агар. Среды Middlebrook и Dubos содержат агар, а среды Lowenstein — яйцо. Преимущество агаровой основы заключается в том, что сопутствующие протеолитические загрязняющие микроорганизмы не разжижают среду. Агаризованные среды обычно рекомендуются для исследования образцов, полученных из нестерильных локусов.

Агаризованные среды можно сделать селективными добавлением антибиотиков, поскольку их затвердевание обеспечивается агаром, а не уплотнением при нагревании, как в яичных средах. Dubos и Middlebrook рекомендовали основу бульона Dubos с олеиновой кислотой для первичного выделения и последующего культивирования туберкулёзных бацилл. В сравнительных исследованиях различных сред основа олеинового агара Dubos показала пригодность для первичного выделения бактерии.

Основа олеинового HiVeg агара Дюбо приготовлена с использованием растительных пептонов вместо пептонов животного происхождения, что исключает риски, связанные с BSE/TSE. Среды Dubos содержат триптон и L-аспарагин в качестве источников азота. Фосфаты вместе с хлоридом кальция буферируют среду и служат источниками фосфатов. Сульфат магния, сульфат цинка, сульфат меди и цитрат аммония железа обеспечивают среду микроэлементами и сульфатами. Олеиновый агар Dubos готовят без глицерина и декстрозы, чтобы избежать роста комменсальных микроорганизмов.

Для выделения микобактерий из исследуемых образцов следует применять стандартные процедуры. Перед культивированием образец необходимо надлежащим образом деконтаминировать в соответствии со стандартными методами.

Подготовка, сбор и обращение с образцами

При выделении микобактерий из исследуемых образцов следует соблюдать стандартные процедуры. Образцы необходимо надлежащим образом деконтаминировать перед культивированием в соответствии со стандартными методами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид и свойства среды

Внешний вид порошка: однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до коричневато-жёлтого цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: гель светло-янтарного цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий, формируется в чашках Петри.

Реакция: реакция 2,0%-ного водного раствора при 25 °C.

pH: 6,40–6,80.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают в присутствии 5–10 % CO₂ с добавлением стерильной олеиново-альбуминовой добавки FD020 и 5 000–10 000 единиц пенициллина, после инкубации при 35–37 °C в течение до 7 суток. Дополнительный рост может наблюдаться в течение 2–4 недель.

Ограничения применения

При отсутствии надлежащих аэробных условий и повышенного содержания CO₂ во время инкубации может быть получен отрицательный результат.

Условия хранения и срок годности

Температура хранения сухой основы: 10–30 °C.

Условия хранения: в плотно закрытом контейнере, в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.

Приготовленная среда: хранить при 2–8 °C.

После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде. Гигроскопичность порошка может приводить к образованию комков. Неправильное хранение также может стать причиной комкования.

После каждого использования контейнер следует герметично закрывать. Продукт необходимо использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке. Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в пределах установленного срока годности и при соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед вскрытием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с действующими руководствами.
• Правила безопасной работы приведены в соответствующих паспортах безопасности.
• Материалы, контактировавшие с образцами, необходимо обеззараживать и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов автоклавированием и/или сжиганием.

При утилизации инфекционных материалов необходимо соблюдать утверждённые лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцом, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Технические характеристики

Техническое отличие

В основе олеинового HiVeg агара Дюбо используются растительные пептоны вместо пептонов животного происхождения; среда также приготовлена без глицерина и декстрозы.