HiMedia MV175A-500G Основа HiVeg агара Борде-Жангу с 1.6% агара

Основа питательной среды HiMedia MV175A-500G Основа HiVeg агара Борде-Жангу с 1,6 % агара — порошкообразная среда без компонентов животного происхождения для культивирования Bordetella. Применяется для обнаружения и выделения Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis из клинических образцов; некоторые виды Haemophilus могут расти на среде и перекрёстно реагировать с антисыворотками к B. pertussis.

Назначение

Среда рекомендована для обнаружения и выделения Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis. Также применяется в методике с чашками для выделения возбудителя коклюша.

Тип изделия: основа питательной среды
Масса: 500 г
Рабочая температура хранения сухого продукта: 10–30 °C

Состав

Для приготовления 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Принцип действия и интерпретация

Агар Борде—Жангу первоначально разработан Bordet и Gengou для культивирования видов Bordetella. Основа агара Борде—Жангу HiVeg с 1,6 % агара аналогична основе агара Борде—Жангу, но отличается концентрацией агара.

Bordetella pertussis является возбудителем коклюша. С помощью методики с чашками для выделения коклюша B. pertussis может быть выделена из глоточных экстрактов, носоглоточного секрета и предназальных мазков.

Kendrick и Eldering модифицировали исходную среду, заменив 50 % человеческой или кроличьей крови на 15 % овечьей крови. Это повышает обогащённость среды и обеспечивает обнаружение B. pertussis по гемолитической реакции. Обогащение базовой среды 25 % человеческой крови способствует обнаружению видов Mycobacterium при малых объёмах посевного материала мокроты и при определении чувствительности к стрептомицину.

Среда содержит достаточное количество питательных компонентов для обильного роста видов Bordetella. Среда также может использоваться для массового культивирования B. pertussis при производстве вакцин и для поддержания маточных культур.

В основе агара Борде—Жангу HiVeg с 1,6 % агара используются пептоны растительного происхождения вместо пептонов животного происхождения, поэтому среда не содержит рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (BSE/TSE).

Настой картофеля и пептон HiVeg служат источниками углерода, азота и длинноцепочечных аминокислот. Глицерин и добавленная кровь обеспечивают дополнительные питательные компоненты. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие.

Инкубацию проводят во влажной камере при относительной влажности 60 % и температуре 37 °C до 7 суток. Перед использованием среду нельзя пересушивать. Через 40 ч колонии B. pertussis приобретают гладкую, выпуклую, блестящую форму и окружены зоной гемолиза. Некоторые штаммы Bordetella не являются гемолитическими. Для подтверждения результата проводят серодиагностику и биохимические тесты.

Для повышения селективности в отношении Bordetella в среду можно асептически добавлять антибиотики: пенициллин, метициллин или цефалексин. Цефалексин показал наибольшую эффективность: он подавляет сопутствующую носоглоточную микрофлору и значительно повышает частоту выделения видов Bordetella. Цефалексин используют в концентрации 40 мг/л; соответствующая селективная добавка имеет код FD004. В качестве противогрибкового средства в среду можно добавлять амфотерицин B в концентрации 10 мкг/мл.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 36 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при температуре 121 °C в течение 15 мин и давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (ориентировочно 0,103 МПа; 1,03 бар).
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Асептически добавьте 15–20 % стерильной свежей дефибринированной крови овцы, кролика, человека или лошади.
6. Для повышения селективности асептически добавьте восстановленное содержимое 2 флаконов селективной добавки Bos (FD004).
7. Тщательно перемешайте компоненты, не допуская образования пузырьков воздуха.
8. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Методика выделения B. pertussis

1. Для выделения B. pertussis из образцов используйте стандартные процедуры.
2. Инкубируйте чашки во влажной камере при температуре 35–37 °C в течение 7 суток.
3. Ежедневно осматривайте чашки с использованием или без использования стереомикроскопа при косом освещении для выявления B. pertussis.
4. При наличии распространяющихся колоний плесени стерильным скальпелем или иглой удалите участок агара, содержащий эти колонии.
5. Учитывайте, что колонии B. pertussis в течение 2–4 суток могут быть не видны без микроскопа.
6. По истечении 7 суток инкубации чашки можно утилизировать как отрицательные.

Сопутствующие колонии плесени могут маскировать колонии B. pertussis. Некоторые виды Haemophilus растут на средах для выделения Bordetella и перекрёстно реагируют с антисыворотками к B. pertussis; целесообразно исключать зависимость роста от факторов X и V.

Типы образцов

Клинические образцы:

• глоточные экстракты;
• носоглоточный секрет;
• предназальные мазки.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с гелем, содержащим 1,6 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-жёлтого цвета.

После добавления 15–20 % стерильной дефибринированной крови: в чашках Петри образуется непрозрачный гель вишнёво-красного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с массовой концентрацией 3,6 % при 25 °C: pH 6,7 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 6,50–6,90.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления 15–20 % стерильной свежей дефибринированной крови и селективной добавки Bos (FD004), после инкубации при температуре 35–37 °C в течение 3–4 суток.

* Соответствующие номера WDCM.

Технические характеристики

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения