HiMedia MV175-500G Основа HiVeg агара Борде-Жангу

Основа сухой питательной среды HiVeg агара Борде-Жангу HiMedia MV175-500G для выделения и изоляции Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis. Применяется для культивирования возбудителей коклюша из клинических образцов; вес упаковки составляет 500 г.

Принцип измерения и интерпретация

Среда Борде-Жангу была разработана для культивирования видов Bordetella. Bordetella pertussis (возбудитель коклюша) может быть изолирована из экстрактов глотки, носоглоточных секретов и мазков из предназальной области с помощью метода «кашлевой пластинки».

В данной модификации среды 50 % человеческой или кроличьей крови заменены на 15 % крови овец для обогащения среды и лучшего выявления B. pertussis по гемолитической реакции. Обогащение базовой среды 25 % человеческой крови способствует обнаружению видов Mycobacterium при малых посевных дозах мокроты, а также используется при тестировании чувствительности к стрептомицину.

Среда высокопитательна, что поддерживает обильный рост видов Bordetella; она также подходит для массового культивирования B. pertussis при производстве вакцин и для поддержания стоковых культур. Основа HiVeg®™ подготовлена с использованием растительных пептонов вместо пептонов животного происхождения, что исключает риски заражения BSE/TSE (губчатой энцефалопатией).

Роль компонентов:

• Настой картофеля и растительный пептон HiVeg®™: источники углерода, азота и аминокислот.
• Глицерин и кровь: дополнительные питательные вещества.
• Хлорид натрия: поддержание осмотического равновесия.

Интерпретация результатов: После 40 часов инкубации колонии B. pertussis выглядят гладкими, выпуклыми, блестящими с зоной гемолиза. Некоторые штаммы Bordetella не обладают гемолитической активностью. Для подтверждения результатов необходимо проведение серодиагностики и биохимических тестов.

Методика приготовления и анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 40,00 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C и асептически добавьте 15–20 % стерильной свежей дефибринированной крови (овечьей, кроличьей, человеческой или лошадиной).
5. Для обеспечения селективности асептически добавьте содержимое 2 флаконов селективной добавки BBos (FD004).
6. Тщательно перемешайте, избегая образования пузырьков воздуха, и разлейте по стерильным чашкам Петри.

Процедура анализа и инкубация

1. Используйте стандартные процедуры для изоляции B. pertussis из образцов.
2. Инкубируйте чашки в увлажненной камере (влажность 60 %) при температуре 35–37 °C в течение 7 дней.
3. Проводите ежедневный осмотр (с использованием диссекционного микроскопа и косого освещения).
4. При наличии плесневых колоний, маскирующих целевой микроорганизм, удалите часть агара со спорами плесени стерильным скальпелем или иглой.
5. Колонии B. pertussis могут быть не видны без микроскопа в течение первых 2–4 дней.
6. По истечении 7 дней инкубации пластины, на которых рост не обнаружен, считаются отрицательными.

Область применения

Среда предназначена для работы с клиническими образцами:

• Экстракты глотки.
• Носоглоточные секреции.
• Предназальные мазки.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Общие параметры

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до желтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 2,0 % агаром.
• Цвет и прозрачность:
  • Базовая среда: светло-желтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
  • После добавления глицерина и 15 % дефибринированной крови: вишнево-красный непрозрачный гель.
• Реакция (pH 4 % водного раствора при 25 °C): 6,7 $\pm$ 0,2.
• Диапазон pH: 6,50–6,90.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при добавлении глицерина, 15 % стерильной дефибринированной крови и селективной добавки Bos (FD004) после инкубации при 35–37 °C в течение 3–4 дней.

Ограничения и предостережения

• Некоторые виды Haemophilus могут расти на данной среде и давать перекрестную реакцию с антисыворотками к B. pertussis. Рекомендуется проверить зависимость от факторов X и V.
• Колонии B. pertussis могут быть не видны без микроскопа в течение 2–4 дней.
• Среда не должна быть пересушена перед использованием.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом проветриваемом месте, вдали от источников возгорания.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков.

Утилизация

Загрязненные материалы и использованные среды должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации в соответствии с установленными лабораторными процедурами по обращению с инфекционными материалами.