HiMedia MV175-500G Основа HiVeg агара Борде-Жангу

Питательная микробиологическая среда HiMedia MV175-500G Основа HiVeg агара Борде-Жангу — порошкообразная растительная основа без компонентов животного происхождения для приготовления селективной среды. Применяется для выявления и выделения Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis из клинических образцов; готовую среду инкубируют при 35–37 °C до 7 суток во влажной камере.

Назначение

Основа HiVeg агара Борде—Жангу рекомендована для выявления и выделения Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis.

Тип образцов

Клинические образцы:

• образцы при коклюше;
• фарингеальные экстракты;
• носоглоточные секреты;
• передненосовые мазки.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия установленным параметрам эффективности.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 40,00 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 15–20 % свежей стерильной дефибринированной крови овцы, кролика, человека или лошади.
6. Для повышения селективности в асептических условиях добавьте регидратированное содержимое 2 флаконов селективной добавки BBos (FD004).
7. Тщательно перемешайте, не допуская включения пузырьков воздуха.
8. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Среды Борде—Жангу первоначально были разработаны для культивирования видов Bordetella. Bordetella pertussis является возбудителем коклюша; с использованием метода кашлевых чашек микроорганизм может быть выделен из фарингеальных экстрактов, носоглоточных секретов и передненосовых мазков.

В модифицированной рецептуре 50 % крови человека или кролика заменено на 15 % крови овцы. Это повышает обогащённость среды и позволяет выявлять B. pertussis по гемолитической реакции. Обогащение базовой среды 25 % крови человека способствует выявлению видов Mycobacterium из небольших посевных доз мокроты и используется при тестировании чувствительности к стрептомицину.

Среда имеет высокую питательную ценность, поддерживает обильный рост видов Bordetella, а также может применяться для массового культивирования B. pertussis при производстве вакцин и для поддержания музейных культур.

Основа агара Борде—Жангу HiVeg®™ содержит растительные пептоны вместо пептонов животного происхождения, что исключает риски, связанные с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (TSE). Настой картофеля и пептон HiVeg®™ служат источниками углерода, азота и аминокислот. Глицерин и обогащение кровью обеспечивают дополнительное поступление питательных веществ. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие.

Инкубацию проводят во влажной камере при влажности 60 % и температуре 37 °C в течение до 7 суток. Перед использованием среду нельзя пересушивать.

Через 40 ч колонии B. pertussis имеют гладкую, выпуклую, блестящую поверхность и зону гемолиза. Некоторые штаммы Bordetella не проявляют гемолитической активности. Для подтверждения результата следует выполнить серодиагностику и биохимические тесты.

Для повышения селективности среды в отношении Bordetella можно использовать антибиотики: пенициллин, метициллин или цефалексин. Цефалексин показал наибольшую эффективность: он подавляет сопутствующую носоглоточную микрофлору и существенно повышает частоту выделения видов Bordetella. Цефалексин применяют в концентрации 40 мг/л; используется добавка FD004.

Амфотерицин B можно добавлять в среду как противогрибковый агент в концентрации 10 мкг/мл.

Методика выделения Bordetella pertussis

1. Для выделения B. pertussis из образцов используйте стандартные процедуры.
2. Инкубируйте чашки во влажной камере при температуре 35–37 °C в течение 7 суток.
3. Ежедневно осматривайте чашки, с использованием или без использования препаровального микроскопа и косого освещения, для выявления B. pertussis.
4. Учитывайте, что сопутствующие колонии плесневых грибов могут маскировать колонии B. pertussis.
5. Стерильным скальпелем или иглой удалите участок агара, содержащий распространяющиеся колонии плесени.
6. При необходимости используйте микроскоп: колонии B. pertussis могут быть не видны без микроскопа в течение 2–4 суток.
7. После 7 суток инкубации чашки можно утилизировать как отрицательные.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: MV175-500G
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Тип продукта: HiVeg™
• Происхождение компонентов: без компонентов животного происхождения, растительная основа
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE)
• Масса: 500 г
• Температура хранения продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Прочный гель, сопоставимый с гелем 2,0 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-жёлтого цвета.
• После добавления глицерина и 15 % об./об. стерильной дефибринированной крови: в чашках Петри образуется непрозрачный гель вишнёво-красного цвета.

Реакция

Реакция 4 % мас./об. водного раствора при 25 °C:

• pH: 6,7 ± 0,2.

Диапазон pH

• pH: 6,50–6,90.

Культуральные характеристики

Культураль