Агаровая питательная среда HiMedia MV173-500G HiVeg агар Мюллера—Хинтона с растительными пептонами и массой 500 г. Среда предназначена для определения чувствительности микроорганизмов к противомикробным препаратам в чистых культурах, выделенных из клинических образцов, и не применяется для медленно растущих микроорганизмов, анаэробов и капнофилов.

Назначение

HiMedia MV173-500G HiVeg агар Мюллера—Хинтона предназначен для определения чувствительности микроорганизмов к противомикробным препаратам, выделенных из клинических образцов.

Тип образцов: клинические образцы — чистые культуры, выделенные из мочи, кала, крови и других материалов.

Среда изготовлена без компонентов животного происхождения: животные пептоны полностью заменены растительными пептонами для исключения рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (BSE/TSE).

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Эквивалент настоя из говяжьего сердца.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 38,0 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Эффективность партии протестирована и стандартизирована в соответствии с действующим документом CLSI M6 — протоколами оценки обезвоженного агара Мюллера—Хинтона. CLSI — Институт клинических и лабораторных стандартов, ранее NCCLS — Национальный комитет по клиническим лабораторным стандартам.

Принцип и интерпретация

Формула Мюллера—Хинтона первоначально была разработана как простая прозрачная агаровая среда для культивирования патогенных видов Neisseria. Впоследствии для культивирования патогенных видов Neisseria были разработаны другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение для определения устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфонамидам.

В настоящее время агар Мюллера—Хинтона используется как тестовая среда для определения чувствительности микроорганизмов к противомикробным препаратам.

Агар Мюллера—Хинтона рекомендован для диффузии противомикробных препаратов, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель в соответствии с утверждённым стандартом CLSI. Выбор среды CLSI обусловлен следующими характеристиками:

1. Хорошая воспроизводимость результатов определения чувствительности между партиями.
2. Низкое содержание ингибиторов сульфонамида, триметоприма и тетрациклина.
3. Поддержка роста большинства неприхотливых патогенных бактерий.
4. Наличие большого объёма данных и практического опыта по оценке характеристик среды.

Kirby—Bauer рекомендовали эту среду для проведения тестов чувствительности к антибиотикам с использованием одного диска с высокой концентрацией препарата. Комитет Всемирной организации здравоохранения по стандартизации тестирования чувствительности принял агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов.

Агар Мюллера—Хинтона с 5 % бараньей кровью и агар Мюллера—Хинтона с гемоглобином рекомендованы для определения чувствительности Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae.

Настой HiVeg® и кислотный гидролизат HiVeg® обеспечивают среду азотистыми соединениями, углеродом, серой и другими необходимыми питательными веществами. Крахмал действует как защитный коллоид, связывающий токсичные вещества, присутствующие в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты отобраны с низким содержанием тимина и тимидина, определяемым по значениям минимальной ингибирующей концентрации (MIC) для Enterococcus faecalis при использовании сульфаметоксазола и триметоприма (SXT).

Метод диско-диффузии Kirby—Bauer

Процедура Kirby—Bauer основана на диффузии противомикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, через агаровую среду. Метод использует диск с одной концентрацией противомикробного препарата; измеряемые диаметры зон задержки роста сопоставляют со значениями минимальной ингибирующей концентрации (MIC).

1. Подготовьте стандартизованную суспензию исследуемого микроорганизма.
2. Равномерно нанесите суспензию стерильным тампоном на всю поверхность приготовленной среды.
3. Разместите на поверхности среды бумажные диски, содержащие заданное количество противомикробных препаратов.
4. Инкубируйте посевы.
5. Измерьте зоны задержки роста вокруг каждого диска.
6. Определите чувствительность путём сравнения диаметров зон со стандартами CLSI.

На результаты диско-диффузионного теста влияют:

• глубина слоя агара;
• активность диска;
• концентрация посевного материала;
• pH среды;
• продукция β-лактамазы исследуемыми микроорганизмами.

Ограничения применения

1. Среда предназначена для определения чувствительности только чистых культур.
2. Плотность посевного материала влияет на размер зоны задержки роста: слишком высокая плотность может привести к уменьшению зоны, а слишком низкая — к её увеличению.
3. Требовательные микроорганизмы могут не расти на этой среде; для них может потребоваться добавление крови.
4. Требовательные анаэробы могут не расти на этой среде.
5. Поскольку определение чувствительности проводится с использованием антибиотических дисков, необходимо соблюдать условия хранения дисков; нарушение хранения может повлиять на активность препаратов.
6. В отдельных случаях результаты определения чувствительности in vitro могут не совпадать с результатами действия препарата in vivo.
7. Среда не предназначена для диско-диффузионного определения чувствительности медленно растущих микроорганизмов, анаэробов и капнофилов.
8. При медленном росте увеличение времени инкубации может привести к разрушению диффундирующего антибиотика и получению неточных результатов.

Работа с клиническими образцами

При работе с клиническими образцами соблюдайте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Среда предназначена только для диагностики in vitro и профессионального применения.

При работе с образцами и культурами:

• прочитайте маркировку перед открыванием контейнера;
• используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица;
• соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики;
• применяйте стандартные меры предосторожности при работе с клиническими образцами;
• при необходимости обращайтесь к паспортам безопасности конкретных материалов.

Контроль качества

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,7 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета, образующийся в чашках Петри.

Реакция: реакция 3,8 % водного раствора при 25 °C; pH 7,3 ± 0,1.

Диапазон pH: 7,20–7,40.

Культуральные характеристики и контроль эффективности

Антибиотикочувствительность определяют в соответствии с действующим стандартом ISO/TS 16782 и установленными пределами приемки. Эффективность среды проверяют в соответствии с руководствами CLSI и EUCAST.

Для тестирования Streptococcus pneumoniae среду дополняют 5 % лошадиной крови и 20 мг/л NAD; инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Для тестирования Haemophilus influenzae среду дополняют 5 % лошадиной крови и 20 мг/л NAD; инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Для тестирования чувствительности к антибиотикам используют различные диски и стандартные штаммы ATCC. Зоны задержки роста измеряют после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч в соответствии с актуальным протоколом CLSI M6 и стандартом CLSI M100.

Зоны для указанных дисков характеризуют содержание тимина и тимидина в среде.

$ Зоны для указанных дисков характеризуют содержание двухвалентных катионов в среде.