HiMedia MV1552-1KT Основа подтверждающего HiVeg агара для L. monocytogenes
Питательная среда HiMedia MV1552-1KT Основа подтверждающего HiVeg агара для L. monocytogenes производства HiMedia предназначена для селективного и дифференциального выделения Listeria monocytogenes из пищевых продуктов и других образцов при хранении основы при 10–30 °C. Основа используется для подтверждения присутствия Listeria monocytogenes по активности фосфатидилинозитол-специфичной фосфолипазы C и ферментации α-метил-D-маннозида; различение ограничено тем, что другие виды Listeria также могут образовывать окрашенные колонии, но без ореола.
Описание
Питательная среда HiMedia MV1552-1KT Основа подтверждающего HiVeg агара для L. monocytogenes производства HiMedia предназначена для селективного и дифференциального выделения Listeria monocytogenes из пищевых продуктов и других образцов при хранении основы при 10–30 °C. Основа используется для подтверждения присутствия Listeria monocytogenes по активности фосфатидилинозитол-специфичной фосфолипазы C и ферментации α-метил-D-маннозида; различение ограничено тем, что другие виды Listeria также могут образовывать окрашенные колонии, но без ореола.
Назначение
Основа подтверждающего HiVeg агара для L. monocytogenes рекомендована для селективного и дифференциального выделения Listeria monocytogenes из пищевых продуктов и других образцов.
Тип изделия: основа питательной среды.
Тип продукта: HiVeg™.
Физическая форма: порошок.
Материал основы пептона: растительного происхождения.
Состав
Состав приведён в расчёте на 1 л среды.
| Компонент | г/л |
|---|---|
| Специальный пептон HiVeg® | 30,000 |
| Дрожжевой экстракт | 6,000 |
| Хлорид натрия | 5,000 |
| Хлорид лития | 10,000 |
| Гидрофосфат натрия двузамещённый | 2,500 |
| Индикатор B.C. | 8,600 |
| α-Метил-D-маннозид | 3,000 |
| Агар | 12,000 |
| Конечное значение pH при 25 °C | 7,2 ± 0,2 |
Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам эффективности.
Тип упаковки: ПЭВП (полиэтилен высокой плотности).
Приготовление среды
- Суспендируйте 38,5 г порошка в 470 мл очищенной или дистиллированной воды.
- Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
- Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов на кв. дюйм, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
- Охладите среду до 45–50 °C.
- В асептических условиях добавьте стерильное восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки OA Selective Supplement (FD212A) и стерильное содержимое одного флакона добавки для обогащения LM Enrichment Supplement II (FD227).
- Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.
Принцип измерения и интерпретация
Listeria monocytogenes — грамположительный пищевой патоген человека, вызывающий тяжёлые инфекции у беременных женщин, которые могут приводить к выкидышу, мертворождению, рождению ребёнка с неонатальным листериозом и менингитом, а также к первичной бактериемии у взрослых и детей.
Патогенность Listeria ivanovii для человека остаётся неопределённой. L. monocytogenes и L. innocua обладают сходными биохимическими свойствами, поэтому не могут быть дифференцированы на традиционных средах PALCAM и Oxford.
Агаровая основа для подтверждения L. mono представляет собой модификацию состава Ottaviani и Agosti для селективного и дифференциального выделения Listeria monocytogenes. В подтверждающей агаровой основе HiVeg® L. mono вместо пептонов животного происхождения используются растительные пептоны; это исключает риски, связанные с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями.
Специальный пептон HiVeg® и дрожжевой экстракт служат источниками азота и обеспечивают питательные вещества, необходимые для роста Listeria. α-Метил-D-маннозид является ферментируемым углеводом. Хлорид лития и добавленные селективные добавки FD212 и FD213 подавляют сопутствующую микрофлору и повышают селективность среды в отношении видов Listeria. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие, а гидрофосфат натрия двузамещённый выполняет буферную функцию.
Дифференциация L. monocytogenes от других видов Listeria основана на активности фосфатидилинозитол-специфичной фосфолипазы C (PIPLC) и ферментации α-метил-D-маннозида. Фермент фосфолипаза C является важным фактором вирулентности и специфичен только для L. monocytogenes и L. ivanovii. Фосфолипаза C, образуемая L. monocytogenes и L. ivanovii, гидролизует очищенный субстрат FD227, добавленный в среду, что приводит к образованию непрозрачного ореола вокруг колоний.
Различение L. monocytogenes и L. ivanovii выполняют по утилизации α-метил-D-маннозида и активности PIPLC:
- L. monocytogenes ферментирует α-метил-D-маннозид, образуя жёлтые колонии с ореолом.
- L. ivanovii не ферментирует α-метил-D-маннозид и образует фиолетовые колонии с ореолом.
- Другие виды Listeria не проявляют активности PIPLC и образуют фиолетовые или жёлтые колонии без ореола.
Образцы
Тип образца: пищевые продукты.
Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.
Меры предосторожности
- Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.
- Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
- При работе с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики.
- При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
- Правила безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.
- После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.
Ограничения метода
Другие виды Listeria не проявляют активности PIPLC и поэтому образуют фиолетовые или жёлтые колонии без ореола.
Контроль качества
Внешний вид
Внешний вид: однородный сыпучий порошок от бежевого до фиолетового цвета.
Гелеобразование
Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,2%-ным агаровым гелем.
Цвет и прозрачность приготовленной среды
Цвет и прозрачность: в чашках Петри образуется фиолетовый опалесцирующий гель.
Реакция среды
Реакция: реакция 7,7%-ного водного раствора при 25 °C.
pH: 7,2 ± 0,2.
Диапазон pH
Диапазон pH: 7,00–7,40.
Культуральные характеристики
Культуральные характеристики определяют с добавлением селективной добавки OA Selective Supplement (FD212A) и добавки для обогащения LM Enrichment Supplement II (FD227) после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.
| Организм | Посевная доза (КОЕ) | Рост | Восстановление | Цвет колонии | Активность PIPLC |
|---|---|---|---|---|---|
| Candida albicans ATCC 10231 (00054*) | ≥10⁴ | подавлен | 0 % | ||
| Enterococcus faecalis ATCC 29212 (00087*) | ≥10⁴ | подавлен | 0 % | ||
| Escherichia coli ATCC 25922 (00013*) | ≥10⁴ | подавлен | 0 % | ||
| Listeria innocua ATCC 33090 (00017*) | 50–100 | обильный | ≥50 % | жёлтый | отрицательная |
| Listeria grayi ATCC 19120 | 50–100 | обильный | ≥50 % | жёлтый | отрицательная |
| Listeria ivanovii ATCC 19119 | 50–100 | обильный | ≥50 % | светло-фиолетовый | положительная, непрозрачный ореол вокруг колонии, демонстрирующей фосфатидилинозитол-специфичную фосфолипазную активность |
| Listeria monocytogenes ATCC 19112 | 50–100 | обильный | ≥50 % | жёлтый | положительная, непрозрачный ореол вокруг колонии, демонстрирующей фосфатидилинозитол-специфичную фосфолипазную активность |
| Listeria seeligeri ATCC 35967 | 50–100 | обильный | ≥50 % | светло-фиолетовый | отрицательная |
| Listeria welshimeri ATCC 43549 | 50–100 | обильный | ≥50 % | жёлтый | отрицательная |
| Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (00025*) | ≥10⁴ | подавлен | 0 % |
* Соответствующие номера WDCM.
Ожидаемая эффективность среды обеспечивается при использовании согласно инструкции на этикетке и в пределах срока годности при хранении при рекомендованной температуре.
Условия хранения и срок годности
- Температура хранения сухой основы: 10–30 °C.
- Условия хранения: плотно закрытый контейнер.
- Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
- Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
- После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка.
- Неправильное хранение может привести к образованию комков.
- Храните в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных
Характеристики
Производитель/Серия
| Производитель | HiMedia |
|---|
Назначение изделия
| Назначение изделия | Основа |
|---|
