HiMedia MV144A-500G Основа колумбийского кровяного агара с 1% агара, HiVeg

Основа питательной среды HiMedia MV144A-500G Основа колумбийского кровяного агара с 1% агара, HiVeg с конечным pH 7,3 ± 0,2 предназначена для приготовления питательных и селективных сред. Применяется для выделения и культивирования требовательных бактерий с добавлением крови или без неё; хранится при температуре 10–30 °C.

Назначение

Основа колумбийского кровяного агара с 1% агара, HiVeg применяется для приготовления базовых питательных сред с кровью и селективных сред с различными комбинациями антимикробных добавок.

Основное назначение: выделение и культивирование требовательных бактерий.

Тип образцов:

• Клинические образцы: спинномозговая жидкость (CSF), образцы крови.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эксплуатационных характеристик.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 39 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 psi, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите стерильную основу до 45–50 °C перед добавлением термочувствительных компонентов.

Кровяной агар

Добавьте 5 % по объёму стерильной дефибринированной крови овцы к стерильной охлаждённой основе.

Шоколадный агар

Добавьте 10 % по объёму стерильной дефибринированной крови овцы к стерильной охлаждённой основе. Нагревайте до 80 °C в течение 10 мин при постоянном перемешивании.

Селективные варианты среды

Среду можно сделать селективной добавлением различных антимикробных препаратов к стерильной основе.

Для Brucella:

• Добавьте восстановленное содержимое 1 флакона селективной добавки NPBCVN (FD005) к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Для Campylobacter:

• Добавьте к 500 мл стерильной расплавленной основы восстановленное содержимое 1 флакона одной из следующих селективных добавок:
  • Blaser-Wang (FD006);
  • Butzler (FD007);
  • Skirrow (FD008);
  • VTCA (FD090);
  • Butzler VI (FD106).
• Одновременно добавьте восстановленное содержимое 1 флакона минеральной ростовой добавки Minerals Growth Supplement (FD009).

Для Gardnerella:

• Добавьте восстановленное содержимое 1 флакона селективной добавки GNA (FD056) к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Для кокков:

• Добавьте восстановленное содержимое 1 флакона одной из селективных добавок:
  • NC (FD030);
  • NNP (FD031);
  • CO (FD119).

Добавки вносят к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Принцип действия и интерпретация

Колумбийская кровяно-агаровая основа представляет собой универсальную питательную агаровую основу, сформулированную Ellner и соавторами в 1966 году и дополнительно обогащаемую стерильной кровью.

Традиционно основы кровяного агара содержали либо гидролизат казеина, обеспечивающий быстрое образование крупных колоний, либо мясной настой, позволяющий получать выраженные гемолитические реакции. Колумбийская агаровая основа объединяет оба компонента.

Добавление специального пептона обеспечивает быстрый и обильный рост требовательных и нетребовательных микроорганизмов. Среда также способствует формированию типичной морфологии колоний, лучшему образованию пигмента и более чётким гемолитическим реакциям.

Колумбийская агаровая основа используется для приготовления:

• сред с добавлением крови;
• селективных сред с различными комбинациями антимикробных препаратов.

В обогащённой колумбийской агаровой среде добавление бацитрацина обеспечивает селективное выделение видов Haemophilus из клинических образцов, особенно из образцов верхних дыхательных путей.

Основа колумбийского кровяного агара с 1% агара, HiVeg производится с использованием растительных пептонов вместо пептонов животного происхождения, поэтому среда не связана с рисками BSE/TSE — губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота и трансмиссивных губчатых энцефалопатий.

Функции компонентов:

• Кукурузный крахмал служит источником энергии и нейтрализует токсичные метаболиты.
• Кровь овцы позволяет выявлять гемолиз и обеспечивает гем, или X-фактор, необходимый для роста многих бактерий.
• Среда не содержит V-фактор — никотинамидадениндинуклеотид. Поэтому Haemophilus influenzae, которому необходимы одновременно X- и V-факторы, на этой среде не растёт.

Из-за относительно высокого содержания углеводов β-гемолитические стрептококки могут проявлять зеленоватую гемолитическую реакцию, которую можно принять за α-гемолиз. Для всех колоний необходимо проводить подтверждающие тесты.

Среда с добавлением стерильной сыворотки может использоваться для проведения теста на вирулентность Corynebacterium diphtheriae. После выполнения установленной методики для C. diphtheriae линии преципитации токсин–антитоксин становятся отчётливо видимыми через 48 ч.

Условия инкубации

Многие патогены требуют углекислого газа, поэтому чашки могут инкубироваться в атмосфере, содержащей приблизительно 3–10 % CO₂.

Специальные условия:

• Культуры Brucella обладают высокой инфекционной опасностью и требуют осторожного обращения; инкубируйте их в атмосфере с 5–10 % CO₂.
• Виды Campylobacter лучше всего растут при 42 °C в микроаэрофильной атмосфере.
• Чашки со добавками для Gardnerella следует инкубировать при 35 °C в течение 48 ч в атмосфере, содержащей 7 % CO₂.

Пробоподготовка и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами соблюдайте соответствующие методики обращения с образцами согласно установленным лабораторным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

• Приготовленные чашки с добавленной средой следует использовать в течение 18 ч после приготовления для обеспечения максимальной селективности.
• Haemophilus influenzae не растёт на среде без V-фактора, поскольку для роста этому микроорганизму необходимы одновременно X- и V-факторы.
• Зеленоватая гемолитическая реакция β-гемолитических стрептококков может быть ошибочно интерпретирована как α-гемолиз; для всех колоний требуются подтверждающие тесты.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Требования безопасности могут быть приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, свободно сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Гелеобразование

Прочный гель, сопоставимый с гелем, содержащим 1,0 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базальная среда: прозрачный гель светло-янтарного цвета, от прозрачного до слегка опалесцирующего