HiMedia MV144-500G Основа колумбийского кровяного агара, HiVeg

Питательная среда HiMedia MV144-500G Основа колумбийского кровяного агара, HiVeg — обезвоженная основа для приготовления кровяного и шоколадного агара, а также селективных и идентификационных сред. Применяется для культивирования клинически значимых микроорганизмов, при этом среда не содержит V-фактор, поэтому Haemophilus influenzae, требующий одновременно X- и V-факторы, на ней не растёт.

Назначение

Основа используется для приготовления:

• кровяного агара;
• шоколадного агара;
• различных селективных сред;
• идентификационных питательных сред.

Тип образца: клинические образцы.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Принцип действия и интерпретация

Основа колумбийского кровяного агара HiVeg® изготовлена с использованием растительных пептонов вместо пептонов животного происхождения, что исключает риски губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота и трансмиссивных губчатых энцефалопатий (BSE/TSE).

Колумбийский кровяной агар разработан на основе рецептуры Ellner. Специальный пептон поддерживает быстрый и обильный рост требовательных и нетребовательных микроорганизмов, способствует формированию типичной морфологии колоний, усиленной выработке пигмента и более чётко выраженным гемолитическим реакциям.

Питательный агар с добавлением переваренной овечьей крови обеспечивает оба фактора, необходимые для роста H. influenzae. Добавление бацитрацина делает обогащённую колумбийскую агаровую среду селективной для выделения видов Haemophilus из клинических образцов, особенно образцов из верхних дыхательных путей.

Основа колумбийского агара применяется для приготовления сред с добавлением крови и селективных сред, в состав которых в качестве добавок входят различные комбинации антимикробных препаратов.

Специальный пептон HiVeg® и дрожжевой экстракт служат источниками углерода, азота, витаминов, аминокислот и других необходимых питательных веществ. Кукурузный крахмал является источником энергии и нейтрализует токсичные метаболиты. Овечья кровь позволяет выявлять гемолиз и служит источником гема (X-фактора), необходимого для роста многих бактерий.

Среда не содержит V-фактор — никотинамидадениндинуклеотид. Поэтому Haemophilus influenzae, которому требуются одновременно X- и V-факторы, на этой среде не растёт.

Колумбийская агаровая основа с добавлением стерильной сыворотки обеспечивает эффективную среду для проведения теста на вирулентность Corynebacterium diphtheriae. После выполнения установленной методики для C. diphtheriae линии преципитации токсин–антитоксин становятся отчётливо видимыми через 48 ч.

Многие патогенные микроорганизмы требуют углекислого газа; поэтому чашки могут инкубироваться в атмосфере, содержащей приблизительно 3–10 % CO₂.

Методика приготовления

1. Приготовьте суспензию 44,0 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите стерильную основу до 45–50 °C перед добавлением термочувствительных компонентов.

Приготовление кровяного агара

Добавьте 5 % об./об. стерильной дефибринированной овечьей крови к стерильной охлаждённой основе.

Приготовление шоколадного агара

1. Добавьте 10 % об./об. стерильной дефибринированной овечьей крови к стерильной охлаждённой основе.
2. Нагревайте при 80 °C в течение 10 мин при постоянном перемешивании.

Приготовление селективных сред

Среду можно сделать селективной добавлением различных антимикробных препаратов к стерильной основе.

Для видов Brucella: добавьте восстановленное содержимое 1 флакона селективной добавки NPBCVN (FD005) к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Для видов Campylobacter: добавьте к 500 мл стерильной расплавленной основы восстановленное содержимое 1 флакона одной из следующих селективных добавок:

• селективная добавка Blaser–Wang (FD006);
• селективная добавка Butzler (FD007);
• селективная добавка Skirrow (FD008);
• селективная добавка VTCA (FD090);
• селективная добавка Butzler VI (FD106).

Одновременно добавьте восстановленное содержимое 1 флакона минеральной ростовой добавки (FD009) и 5–7 % об./об. конской или овечьей крови.

Для видов Gardnerella: добавьте восстановленное содержимое 1 флакона селективной добавки GNA (FD056) к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Для кокков: добавьте восстановленное содержимое 1 флакона одной из следующих селективных добавок к 500 мл стерильной расплавленной основы:

• селективная добавка NC (FD030);
• селективная добавка NNP (FD031);
• селективная добавка CO (FD119).

Условия культивирования и ограничения

• Культуры Brucella обладают высокой инфекционностью и требуют осторожного обращения; инкубируйте их при 5–10 % CO₂.
• Виды Campylobacter лучше всего растут при 42 °C в микроаэрофильной атмосфере.
• Чашки со средой с добавкой для Gardnerella следует инкубировать при 35 °C в течение 48 ч в атмосфере, содержащей 7 % CO₂.
• После установленной методики линии преципитации токсин–антитоксин для C. diphtheriae отчётливо видимы через 48 ч.
• Некоторые требовательные микроорганизмы, например Haemophilus influenzae, могут не расти на этой среде; может потребоваться добавление крови.
• Из-за относительно высокого содержания углеводов β-гемолитические стрептококки могут давать зеленоватую гемолитическую реакцию, которую можно ошибочно принять за α-гемолиз.
• Для всех колоний необходимо выполнять подтверждающие тесты.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с гелем 1,5 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Основная среда: прозрачный гель светло-янтарного цвета, от прозрачного до слегка опалесцирующего.
• После добавления 5 % м/о стерильной дефибринированной крови: в чашках Петри образуется непрозрачный гель вишнёво-красного цвета.

Реакция среды

Реакция водного раствора с концентрацией 4,4 % м/о при 25 °C.

pH: 7,3 ± 0,2.

Диапазон pH: 7,10–7,50.

Тест стимуляции роста

Тест выполняется в соответствии с гармонизированной методикой USP/EP/BP/JP.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления 5 % м/о стерильной дефибринированной крови и инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.