HiMedia MV144-100G Основа колумбийского кровяного агара, HiVeg

Питательная среда HiMedia MV144-100G Основа колумбийского кровяного агара, HiVeg предназначена для приготовления кровяного и шоколадного агара, а также селективных и идентификационных сред; расход составляет 44,0 г на 1000 мл воды. Основа используется для культивирования требовательных и нетребовательных микроорганизмов, однако не содержит фактора V, поэтому Haemophilus influenzae, которому необходимы факторы X и V, на этой среде не растёт без соответствующего обогащения.

Назначение

Основа используется для приготовления:

• кровяного агара;
• шоколадного агара;
• различных селективных сред;
• идентификационных питательных сред.

Тип образца: клинические образцы.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам эффективности.

Технические характеристики

• Наименование: основа колумбийского кровяного агара HiVeg
• Артикул: MV144-100G
• Производитель: HiMedia
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Масса: 100 г
• Температура хранения продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C
• Конечный pH: 7,3 ± 0,2 при 25 °C
• Диапазон pH: 7,10–7,50
• Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаровым гелем
• Цвет и прозрачность исходной приготовленной среды: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета
• Цвет и внешний вид среды после добавления 5 % стерильной дефибринированной крови: непрозрачный гель вишнёво-красного цвета в чашках Петри
• Реакция: реакция 4,4 % водного раствора при 25 °C; pH 7,3 ± 0,2
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке

Приготовление среды

1. Суспендируйте 44,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм, что соответствует примерно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите стерильную основу до 45–50 °C перед добавлением термочувствительных компонентов.

Приготовление кровяного агара

Добавьте 5 % об./об. стерильной дефибринированной крови овцы к стерильной охлаждённой основе.

Приготовление шоколадного агара

1. Добавьте 10 % об./об. стерильной дефибринированной крови овцы к стерильной охлаждённой основе.
2. Нагревайте до 80 °C в течение 10 мин при постоянном перемешивании.

Приготовление селективных сред

Селективность среды обеспечивается добавлением различных противомикробных препаратов к стерильной основе.

Для видов Brucella: добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки NPBCVN (FD005) к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Для видов Campylobacter: добавьте к 500 мл стерильной расплавленной основы восстановленное содержимое одного флакона одной из следующих селективных добавок:

• Blaser-Wang (FD006);
• Butzler (FD007);
• Skirrow (FD008);
• VTCA (FD090);
• Butzler VI (FD106).

Дополнительно добавьте восстановленное содержимое одного флакона минеральной ростовой добавки (FD009) и 5–7 % об./об. крови лошади или овцы.

Для видов Gardnerella: добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки GNA (FD056) к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Для кокков: добавьте восстановленное содержимое одного флакона одной из селективных добавок:

• NC (FD030);
• NNP (FD031);
• CO (FD119).

Добавки вносят к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Принцип действия и интерпретация

Основа колумбийского кровяного агара HiVeg приготовлена с использованием растительных пептонов вместо пептонов животного происхождения, благодаря чему среда не связана с рисками губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота (BSE) и трансмиссивных губчатых энцефалопатий (TSE).

Колумбийский кровяной агар разработан Ellner и соавторами. Специальный пептон поддерживает быстрый и обильный рост требовательных и нетребовательных микроорганизмов. Среда также способствует формированию типичной морфологии колоний, более выраженной продукции пигмента и более чётко определяемых гемолитических реакций.

Fildes установил, что питательный агар с добавлением переваренной крови овцы обеспечивает оба фактора, необходимые для роста H. influenzae. Добавление бацитрацина делает обогащённую колумбийскую агаровую среду селективной для выделения видов Haemophilus из клинических образцов, особенно из образцов верхних дыхательных путей.

Колумбийская агаровая основа применяется для приготовления сред с кровью и селективных сред, в которых в качестве добавок используются различные комбинации противомикробных препаратов.

Специальный пептон HiVeg® и дрожжевой экстракт служат источниками:

• углерода;
• азота;
• витаминов;
• аминокислот;
• необходимых питательных веществ.

Кукурузный крахмал является источником энергии и нейтрализует токсичные метаболиты. Кровь овцы позволяет выявлять гемолиз и обеспечивает гем — фактор X, необходимый для роста многих бактерий.

Среда не содержит фактор V — никотинамид-адениндинуклеотид. Поэтому Haemophilus influenzae, которому необходимы одновременно факторы X и V, не растёт на этой среде.

Колумбийская агаровая основа с добавлением стерильной сыворотки образует эффективную среду для тестирования вирулентности Corynebacterium diphtheriae. После выполнения установленной методики для C. diphtheriae линии преципитации токсин–антитоксин становятся чётко видимыми через 48 ч.

Многие патогенные микроорганизмы требуют углекислого газа; поэтому чашки могут инкубироваться в атмосфере, содержащей приблизительно 3–10 % CO₂.

Условия культивирования

• Культуры Brucella: микроорганизмы высокоинфекционны и требуют осторожного обращения; инкубировать в атмосфере с 5–10 % CO₂.
• Виды Campylobacter: оптимально выращивать при 42 °C в микроаэрофильной атмосфере.
• Чашки со смесями для Gardnerella: инкубировать при 35 °C в течение 48 ч в атмосфере с 7 % CO₂.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Исходная среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.
• После добавления 5 % масс./об. стерильной дефибринированной крови: в чашках Петри образуется непрозрачный гель вишнёво-красного цвета.

Реакция и pH

• Реакция: 4,4 % водный раствор при 25 °C.
• pH: 7,3 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,10–7,50.

Тест стимуляции роста

Тест стимуляции роста выполняется в соответствии с гармонизированной методикой USP/EP/BP/JP.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления 5 % масс./об. стерильной дефибринированной крови и инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.