HiMedia MV1354-500G Основа M-CP HiVeg агара

Основа питательной среды HiMedia MV1354-500G Основа M-CP HiVeg агара предназначена для выделения и количественного определения Clostridium perfringens в пробах воды методом мембранной фильтрации. Основа используется после добавления селективных добавок FD153 и FD154 или модифицированной FD154A, с инкубацией в анаэробной атмосфере.

Назначение

Продукт предназначен для выделения и количественного определения Clostridium perfringens из проб воды методом мембранной фильтрации, а также для анализа пищевых образцов.

Применение основы рекомендовано Директивой Совета Европейского союза 98/83/EC для анализа проб воды.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Технические характеристики

• Назначение: основа питательной среды
• Масса: 500 г
• Тип образцов: пробы воды, пищевые образцы
• Конечный pH при 25 °C: 7,6 ± 0,2
• Температура хранения сухого продукта: 15–25 °C
• Температура хранения готовой среды: 2–8 °C
• Форма выпуска: светло-жёлтый или светло-зелёный однородный сыпучий порошок

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 35,60 г сухой среды, что соответствует количеству среды для приготовления 485 мл, в 485 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки M-CP Selective Supplement I (FD153) и одного флакона селективной добавки M-CP Selective Supplement II (FD154) либо регидратированное содержимое одного флакона модифицированной селективной добавки M-CP Selective Supplement II (FD154A).
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация результатов

Клостридии относятся к основным причинам пищевых отравлений и заболеваний желудочно-кишечного тракта. Это грамположительные спорообразующие палочки, естественно обитающие в почве. К этому семейству относятся Clostridium botulinum, продуцирующий один из наиболее сильнодействующих известных токсинов, Clostridium tetani, являющийся возбудителем столбняка, и Clostridium perfringens, часто выявляемый при инфекциях ран и диарее.

Использование токсинов для повреждения организма-хозяина является механизмом патогенности многих бактерий. Основным фактором вирулентности C. perfringens служит энтеротоксин CPE, который секретируется после проникновения бактерии в кишечник хозяина и участвует в развитии пищевых отравлений и других желудочно-кишечных заболеваний.

Для количественного определения C. perfringens разработано несколько твёрдых питательных сред. Селективность таких сред обеспечивается включением одного или нескольких антибиотиков, подавляющих определённые анаэробные или факультативно-анаэробные микроорганизмы.

Основа M-CP агара приготовлена по формуле Armon и Payment. Основа M-CP HiVeg® агара изготовлена с полной заменой пептонов животного происхождения на пептоны растительного происхождения для исключения рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями.

Гидролизат HiVeg® № 1 и дрожжевой экстракт обеспечивают азотистые и углеродистые соединения, аминокислоты с длинной цепью, витамины, минеральные вещества и другие необходимые факторы роста. Сахароза служит сбраживаемым углеводом. Бромкрезоловый пурпурный используется как индикатор pH. Индоксил-β-D-глюкозид является хромогенным субстратом для β-D-глюкозидазы или целлобиазы, а дифосфат фенолфталеина — субстратом для выявления кислой фосфатазы.

Добавление D-циклосерина и полимиксина B в составе FD153 подавляет сопутствующую неклостридиальную микрофлору и позволяет анализировать вегетативные клетки и споры клостридий. Дополнительная селективность обеспечивается инкубацией в анаэробных условиях.

Жёлтые колонии, не обладающие активностью целлобиазы, которые после воздействия паров аммиака в течение 30 с приобретают цвет от старо-розового до розово-красного, рассматриваются как предположительно положительные для C. perfringens.

Цветовая дифференциация на M-CP агаре иногда затруднена. Поэтому для подтверждения отбирают как типичные колонии — жёлтые, становящиеся розовыми, — так и атипичные колонии: зелёные или сохраняющие жёлтую окраску после воздействия паров аммиака.

Предположительно положительные культуры C. perfringens могут быть подтверждены по следующим признакам и тестам:

• восстановление сульфита;
• грамположительные спорообразующие палочки;
• неподвижность;
• восстановление нитрата;
• разжижение желатина;
• ферментация лактозы;
• другие биохимические тесты.

Подготовка и обращение с образцами

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно руководствам и местным стандартам.

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки согласно руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Цветовая дифференциация на M-CP агаре иногда затруднена. Для подтверждения отбирают типичные колонии, меняющие цвет с жёлтого на розовый, а также атипичные зелёные колонии или колонии, сохраняющие жёлтую окраску после воздействия паров аммиака.
2. Из-за различий в пищевых потребностях отдельных штаммов некоторые из них могут демонстрировать слабый рост на этой среде.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или светло-зелёный однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность готовой среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель фиолетового цвета.

Реакция среды

Реакция водного раствора с концентрацией 7,12 % масса/объём при 25 °C: pH 7,6 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,40–7,80.

Культуральные характеристики

Продуктивность

Культуральную реакцию оценивали после инкубации в анаэробной атмосфере при 44 ± 1 °C в течение 21 ± 3 ч с добавлением стерильных селективных добавок M-CP Selective Supplement I (FD153) и M-CP Selective Supplement II (FD154) либо модифицированной селективной добавки M-CP Selective Supplement II (FD154A).

Степень восстановления принимается равной 100 % для роста бактерий на референсной среде — агаре с переваром казеина и сои, также называемом триптон-соевым агаром.

Спе