HiMedia MV1354-500G Основа M-CP HiVeg агара

Основа сухой питательной среды M-CP HiVeg агар HiMedia MV1354-500G для изоляции и подсчета Clostridium perfringens. Рекомендована Директивой Совета Европейского Союза 98/83/EC для анализа проб воды методом мембранной фильтрации; вес упаковки 500 г.

Принцип измерения и интерпретация

Среда разработана по формуле Армона и Пеймента. M-CP HiVeg агар полностью заменяет пептоны животного происхождения на растительные для исключения рисков BSE/TSE (болезни КРС и трансмиссивных губчатых энцефалопатий).

Роль компонентов

• HiVeg® гидролизат №1 и дрожжевой экстракт: источники азота, углерода, длинноцепочечных аминокислот, витаминов и минералов.
• Сахароза: ферментируемый углевод.
• Бромкрезоловый пурпурный: pH-индикатор.
• Индоксил-β-D-глюкозид: хромогенный субстрат для β-D-глюкозидазы (целлобиоазы).
• D-циклосерин и полимиксин B (добавляются в виде селективных добавок): подавляют рост неклостридиальной микрофлоры, позволяя анализировать как вегетативные клетки, так и споры.

Интерпретация результатов

Селективность обеспечивается сочетанием антибиотиков и инкубации в анаэробных условиях.

• Предположительные C. perfringens: жёлтые колонии (целлобиоза-отрицательные), которые при воздействии паров аммиака в течение 30 секунд меняют цвет на старое розе или розово-красный.
• Подтверждение: из-за возможной сложности дифференциации цвета отбирают как типичные (жёлтые $\rightarrow$ розовые), так и атипичные колонии (зелёные или остающиеся жёлтыми после аммиака) для подтверждения с помощью тестов на восстановление сульфита, окрашивание по Грамму (грамположительные спорообразующие палочки), отсутствие подвижности, восстановление нитратов, разжижение желатина и ферментацию лактозы.

Методика приготовления и использования

Приготовление среды

1. Суспендируйте 35,60 г сухой среды (эквивалент веса в 485 мл) в 485 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте содержимое 1 флакона селективной добавки M-CP Selective Supplement I (FD153) и 1 флакона M-CP Selective Supplement II (FD154), либо содержимое 1 флакона модифицированной добавки M-CP Selective Supplement II, Modified (FD154A).
6. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Работа с образцами

• Пробы воды: сбор и обработка согласно руководствам и местным стандартам.
• Пробы пищевых продуктов: сбор и обработка согласно соответствующим методическим указаниям.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Контроль качества

• Внешний вид: светло-жёлтый или светло-зелёный гомогенный свободнотекущий порошок.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5 % агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: пурпурный прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
• Реакция: pH 7,6 $\pm$ 0,2 для 7,12 % (масс/об) водного раствора при 25 °C.
• Диапазон pH: 7,40–7,80.

Культуральные характеристики

Инкубация проводилась в анаэробной атмосфере при 44 $\pm$ 1 °C в течение 21 $\pm$ 3 ч с добавлением стерильных селективных добавок (FD153 и FD154 или FD154A). Степень восстановления считается 100 % при росте бактерий на контрольной среде — соево-казеиновом дигестате-агаре (Tryptone Soya Agar).

* Соответствующие номера WDCM.

Область применения и ограничения

Применяется для анализа проб воды и пищевых продуктов.

Ограничения

1. Возможна сложность дифференциации цвета колоний; требуется подтверждение для типичных и атипичных форм.
2. Из-за вариативности трофических потребностей некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение сухой среды: в плотно закрытом контейнере при температуре 15–25 °C. Из-за гигроскочности продукта необходимо плотно закрывать флакон для предотвращения комкования.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Утилизация: загрязнённые материалы подлежат стерилизации в автоклаве или сжиганию в соответствии с лабораторными протоколами работы с инфекционными материалами.