HiMedia MV1354-100G Основа M-CP HiVeg агара

Основа сухой питательной среды M-CP HiVeg агар производства HiMedia для изоляции и подсчёта Clostridium perfringens в пробах воды. Рекомендуется Директивой Совета Европейского Союза 98/83/EC для использования с методом мембранной фильтрации; вес упаковки 100 г.

Область применения

Среда предназначена для выделения и количественного определения Clostridium perfringens в пробах воды и пищевых продуктах. Благодаря замене пептонов животного происхождения на растительные (линейка HiVeg®), среда исключает риски заражения BSE/TSE (губчатой энцефалопатией).

Принцип измерения

Селективность среды обеспечивается добавлением антибиотиков (D-циклосерин и полимиксин B), которые подавляют рост неклостридиальной микрофлоры, что позволяет анализировать как вегетативные клетки, так и споры. Дополнительная селективность достигается за счёт инкубации в анаэробных условиях.

Основные компоненты и их функции:

• HiVeg® гидролизат №1 и дрожжевой экстракт: источники азота, углерода, длинноцепочечных аминокислот, витаминов и минералов.
• Сахароза: ферментируемый углевод.
• Бромкрезоловый пурпурный: pH-индикатор.
• Индоксил-β-D-глюкозид: хромогенный субстрат для β-D-глюкозидазы (целлобиязы).

Интерпретация результатов:

• Предположительные колонии C. perfringens имеют жёлтый цвет (целлобиаза-отрицательные), который при воздействии паров аммиака в течение 30 секунд меняется на цвет «старой розы» или розово-красный.
• Из-за возможной сложности дифференциации цвета, для подтверждения отбирают как типичные (жёлтые $\rightarrow$ розовые), так и атипичные колонии (зелёные или остающиеся жёлтыми после паров аммиака).
• Подтверждение C. perfringens проводится с помощью тестов на восстановление сульфита, определение грамположительных неподвижных спорообразующих палочек, восстановление нитратов, разжижение желатина и ферментацию лактозы.

Методика приготовления и использования

Приготовление среды

1. Суспендируйте 35,60 г сухой среды (эквивалент веса для 485 мл) в 485 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$ 0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. Асептически добавьте восстановленное содержимое 1 флакона селективной добавки M-CP I (FD153) и 1 флакона селективной добавки M-CP II (FD154) ИЛИ восстановленное содержимое 1 флакона модифицированной селективной добавки M-CP II (FD154A).
6. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Процедура анализа

• Типы образцов: пробы воды, пищевые продукты.
• Сбор проб: осуществляется согласно местным стандартам и руководствам по сбору проб воды и продуктов питания.
• Инкубация: в анаэробной атмосфере при температуре 44 $\pm$ 1 °C в течение 21 $\pm$ 3 часов.

Технические характеристики

Состав, г/л

Контроль качества

• Внешний вид: светло-жёлтый или светло-зелёный однородный свободнотекучий порошок.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5 % раствором агара.
• Цвет и прозрачность: пурпурный прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
• Реакция: pH 7,6 $\pm$ 0,2 для 7,12 % (масса/объём) водного раствора при 25 °C.
• Диапазон pH: 7,40–7,80.

Культуральные характеристики

Инкубация в анаэробной атмосфере при 44 $\pm$ 1 °C в течение 21 $\pm$ 3 часов с добавлением селективных добавок (FD153 и FD154 или FD154A). Скорость восстановления 100 % считается по росту на контрольной среде — соево-казеиновом дигерированном агаре (Tryptone Soya Agar).

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение сухой среды: в плотно закрытом контейнере при температуре 15–25 °C в сухом вентилируемом месте, защищённом от экстремальных температур и источников возгорания.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон необходимо плотно закрыть во избежание образования комков.

Ограничения применения

1. Дифференциация колоний по цвету может быть затруднена, что требует отбора атипичных колоний для подтверждающих тестов.
2. Из-за вариативности потребностей в питательных веществах некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост на данной среде.

Меры предосторожности и утилизация

• При работе использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица.
• Соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности.
• Загрязнённые материалы и использованные среды подлежат обязательной стерилизации в автоклаве или сжиганию перед утилизацией.