HiMedia MV1354-100G Основа M-CP HiVeg агара

Питательная среда HiMedia MV1354-100G Основа M-CP HiVeg агара для выделения и количественного определения Clostridium perfringens методом мембранной фильтрации. Применяется при анализе проб воды и пищевых продуктов; сухая среда хранится при 15–25 °C, а приготовленная — при 2–8 °C.

Назначение

Основа M-CP HiVeg агара предназначена для выделения и количественного определения Clostridium perfringens из проб воды методом мембранной фильтрации. Также допускается применение для анализа пищевых проб.

Среда приготовлена с заменой пептонов животного происхождения на растительные пептоны HiVeg® для исключения рисков, связанных с BSE/TSE. Рецептура основывается на формуле Armon и Payment. Методика применения для выделения и количественного определения Clostridium perfringens из проб воды рекомендована Директивой Совета Европейского союза 98/83/EC.

Состав

Состав, г/л:

Рецептура скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация результатов

Клостридии относятся к основным причинам пищевых отравлений и желудочно-кишечных заболеваний. Это грамположительные спорообразующие палочки, естественно присутствующие в почве. К роду относятся, в частности, Clostridium botulinum, продуцирующий один из наиболее сильнодействующих известных токсинов, Clostridium tetani, являющийся возбудителем столбняка, и Clostridium perfringens, который часто обнаруживается при инфекциях ран и диарее.

Одним из механизмов вирулентности многих патогенных бактерий является повреждение организма-хозяина токсинами. Основным фактором вирулентности C. perfringens считается энтеротоксин CPE, секретируемый при инвазии кишечника и способствующий развитию пищевых отравлений и других желудочно-кишечных заболеваний.

Для количественного определения C. perfringens разработаны различные плотные питательные среды. Селективность таких сред обеспечивается добавлением одного или нескольких антибиотиков, подавляющих отдельные анаэробные или факультативно-анаэробные микроорганизмы.

Гидролизат HiVeg® № 1 и дрожжевой экстракт обеспечивают среду азотистыми и углеродсодержащими соединениями, аминокислотами с длинной цепью, витаминами, минеральными веществами и другими факторами роста. Сахароза служит ферментируемым углеводом. Бромкрезоловый пурпуровый используется как индикатор pH.

Индоксил-β-D-глюкозид является хромогенным субстратом для β-D-глюкозидазы, или целлобиазы, а дифенилфталат предназначен для выявления кислой фосфатазы. В составе основы также предусмотрено применение D-циклосерина и полимиксина B из селективной добавки FD153. Эти компоненты подавляют сопутствующую неклостридиальную микрофлору и позволяют анализировать вегетативные клетки и споры клостридий. Дополнительная селективность обеспечивается инкубацией в анаэробных условиях.

Жёлтые колонии, не обладающие активностью целлобиазы и изменяющие цвет на старо-розовый или розово-красный после воздействия паров аммиака в течение 30 с, рассматриваются как предположительно принадлежащие C. perfringens. Цветовая дифференциация на M-CP агаре иногда затруднена, поэтому для подтверждения отбирают как типичные колонии — жёлтые, изменяющие цвет на розовый, — так и атипичные колонии: зелёные или сохраняющие жёлтую окраску после воздействия паров аммиака.

Предположительно идентифицированные C. perfringens могут быть подтверждены по следующим признакам и биохимическим тестам:

• восстановление сульфита;
• грамположительная реакция;
• спорообразование;
• неподвижность;
• восстановление нитрата;
• разжижение желатина;
• ферментация лактозы;
• другие биохимические тесты.

Приготовление среды

1. Взвесьте 35,60 г сухой среды — это эквивалентно количеству обезвоженной среды для приготовления 485 мл — и суспендируйте в 485 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм и температуре 121 °C в течение 15 мин. Давление соответствует примерно 0,103 МПа.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки M-CP I (FD153) и одного флакона селективной добавки M-CP II (FD154) либо восстановленное содержимое одного флакона модифицированной селективной добавки M-CP II (FD154A).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Типы исследуемых проб

• Пробы воды.
• Пробы пищевых продуктов.

Сбор и обращение с пробами

Для проб воды используйте соответствующие методы отбора и обработки в соответствии с руководствами и местными стандартами. Для пищевых проб применяйте соответствующие методы отбора и обработки согласно действующим руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или светло-зелёный однородный свободно сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель фиолетового цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 7,12 % при 25 °C: pH 7,6 ± 0,2.

pH

7,40–7,80.

Культуральные характеристики

Условия оценки продуктивности

Культуральную реакцию оценивали после инкубации в анаэробной атмосфере при 44 ± 1 °C в течение 21 ± 3 ч с добавлением стерильных селективных добавок M-CP I (FD153) и M-CP II (FD154) либо модифицированной селективной добавки M-CP II (FD154A).

Степень восстановления принимается равной 100 % для роста бактерий на референсной среде — соево-казеиновом агаре, также обозначаемом как триптиказо-соевый агар.

Условия оценки специфичности

Культуральную реакцию оценивали после инкубации в анаэробной атмосфере при 44 ± 1 °C в течение 21 ± 3 ч с добавлением стерильных селективных добавок M-CP I (FD153) и M-CP II (FD154) либо модифицированной селективной добавки M-CP II (FD154A).

Условия оценки селективности

Культуральную реакцию оценивали после инкубации в анаэробной атмосфере при 44 ± 1 °C в течение 21 ± 3 ч с добавлением стерильных селективных добавок M-CP I (FD153) и M-CP II (FD154) либо модифицированной селективной добавки M-CP II (FD154A).

* Соответствующие номера WDCM.

Ограничения применения

1. Цветовая дифференциация на M-