HiMedia MV1327-500G Основа Fraser HiVeg бульона

Сухая питательная среда HiMedia MV1327-500G Основа Fraser HiVeg бульона для изоляции и подсчета Listeria monocytogenes в пищевых продуктах и кормах для животных. Рекомендуется стандартами ISO в качестве среды для первичного и вторичного обогащения; полностью исключает использование пептонов животного происхождения для снижения рисков BSE/TSE.

Принцип измерения

Среда обеспечивает оптимальные условия для роста видов Listeria. Все представители рода Listeria обладают бета-глюкозидазной активностью, что проявляется в почернении среды. Бактерии гидролизуют эскулин (замещенный глюкозид) до глюкозы и эскулетина; последний взаимодействует с ионами железа из цитрата аммония-железа (добавка FD141), образуя черно-коричневый комплекс 6,7-дигидроксикумарина. Цитрат аммония-железа также стимулирует рост L. monocytogenes.

Для подавления сопутствующей микрофлоры используются следующие механизмы:

• Высокая концентрация хлорида натрия и добавление хлорида лития подавляют рост энтерококков, которые также способны гидролизовать эскулин.
• Налидиксовая кислота и гидрохлорид акрифлавина (добавка FD125I) подавляют рост большинства других сопровождающих бактерий.

Состав

Основа бульона Fraser HiVeg® (MV1327), г/л:

Добавки, вносимые после автоклавирования

Методика приготовления и проведения анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 54,92 г сухой среды (эквивалентный вес на литр) в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте до полного растворения.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте регидратированное содержимое:
   • Для первичного обогащения (на 1000 мл): 1 флакон добавки Fraser Selective Supplement (FD125I) и 2 флакона Fraser Supplement (FD141).
   • Для вторичного обогащения (на 500 мл): по 1 флакону каждой добавки.
6. Тщательно перемешайте и разлейте по пробиркам или колбам.

Процедура анализа

1. Подготовка первичной суспензии: Среда используется как разбавляющая жидкость. Соотношение: 25 г (или 25 мл) образца на 225 мл среды (M1327 + 1 флакон FD125I + 2 флакона FD141).
2. Первичное обогащение: Инкубируйте разведение в бульоне Half Fraser при 30 ± 1 °C в течение 24–26 часов. Допускается хранение преобогащенного образца при 5 °C не более 72 часов перед переносом во вторичную среду. В процессе инкубации может развиться черное окрашивание.
3. Вторичное обогащение: Перенесите 0,1 мл культуры из первичного обогащения в 10 мл бульона Fraser. Инкубируйте при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 2 часов. Для восстановления видов Listeria, отличных от L. monocytogenes, рекомендуется дополнительная инкубация еще 24 часа.
4. Посев: Образцы после первичного и вторичного обогащения пересевают на агар HiCrome® Listeria Ottaviani-Agosti (M1540I), среду Listeria Oxford (M1145) или идентификационный агар Listeria (PALCAM, M1064I). Инкубируйте при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 2 часов (для других видов Listeria spp. — дополнительно 24 ± 2 часа).

Технические характеристики

• Назначение: Основа для селективного бульона
• Вес: 500 г
• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до желтого цвета
• Цвет и прозрачность готовой среды:
  • Базовая среда: желтый прозрачный раствор с небольшим осадком.
  • После добавления компонентов: флуоресцентно-желтый прозрачный раствор с небольшим осадком.
• Реакция (5,49% р-р при 25 °C): pH 7,2 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,00–7,40
• Температура хранения: 10–30 °C (сухая среда), 2–8 °C (готовая среда)

Ограничения и предупреждения

• Различные организмы могут демонстрировать вариативность роста на данной среде.
• Присутствие L. monocytogenes может быть маскировано другими видами, такими как L. inocua и L. ivanovii.
• Требуется обязательный последующий посев на селективные среды.
• При работе с культурами соблюдайте правила микробиологической безопасности; утилизация должна проводиться путем автоклавирования или сжигания.

Культуральные характеристики

Первичное обогащение (Half Fraser)

Инкубация при 30 ± 1 °C в течение 25 ± 1 ч с добавлением FD125I и FD141. Последующий посев на M1540I при 37 ± 1 °C в течение 48 ± 4 ч.

Продуктивность

Селективность

Инкубация при 30 ± 1 °C в течение 25 ± 1 ч с добавлением FD125I и FD141. Последующий посев на Tryptone Soya Agar (M290) при 37 ± 1 °C в течение 48 ± 4 ч.

Вторичное обогащение (Fraser)

Инкубация при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч с добавлением FD125I и FD141. Последующий посев на M1540I при 37 ± 1 °C в течение 48 ± 4 ч.

Продуктивность