Основа питательной среды HiMedia MV1327-500G Основа Fraser HiVeg бульона производства HiMedia предназначена для приготовления обогащённой среды с растительными пептонами, масса упаковки — 500 г. Основа применяется для первичного и вторичного обогащения при выделении и подсчёте Listeria monocytogenes из пищевых продуктов и кормов для животных, с хранением продукта при 10–30 °C.

Назначение и область применения

Среда приготовлена с полной заменой пептонов животного происхождения на растительные пептоны. Основа Fraser HiVeg предназначена для приготовления первичной и вторичной обогащающей среды при выделении и подсчёте Listeria monocytogenes из пищевых продуктов и кормов для животных.

Тип образца: пищевые продукты.

В отличие от базовых сред с пептонами животного происхождения, в составе Fraser HiVeg используются растительные пептоны; это исключает риски BSE/TSE, связанные с пептонами животного происхождения.

Состав

Основа Fraser HiVeg®: MV1327.

Добавки после автоклавирования

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

• Эквивалентен ферментативному перевариванию тканей животного происхождения.

• $ Эквивалентен ферментативному перевариванию казеина.

• Эквивалентен мясному экстракту.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 54,92 г сухой среды, что соответствует массе обезвоженной среды на 1 л, в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм, ориентировочно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Для первичного обогащения асептически добавьте к 1000 мл среды восстановленное содержимое 1 флакона селективной добавки Fraser Selective Supplement FD125I и 2 флаконов добавки Fraser Supplement FD141.
6. Для вторичного обогащения асептически добавьте по 1 флакону каждой добавки к 500 мл среды.
7. Тщательно перемешайте и разлейте среду в пробирки или колбы в необходимом объёме.

Принцип действия и интерпретация

Виды Listeria широко распространены в окружающей среде и выделяются из почвы, разлагающихся растительных материалов, силоса, сточных вод, воды, кормов для животных, свежего и замороженного мяса птицы, мяса, сырого молока, сыра, а также от бессимптомных носителей среди людей и животных.

L. monocytogenes преимущественно вызывает у человека менингит, энцефалит или септицемию. У беременных женщин L. monocytogenes часто вызывает гриппоподобное бактериемическое заболевание, которое без лечения может привести к амниониту и инфицированию плода, выкидышу, мертворождению или преждевременным родам. Основным путём передачи являются контаминированные пищевые продукты.

Основа Fraser Broth разработана на основе формулы Fraser и Sperber и применяется для обнаружения видов Listeria в пищевых продуктах. Состав среды обеспечивает условия для роста Listeria. Среда рекомендуется ISO для первичного и вторичного обогащения видов Listeria.

Пептон HiVeg®, гидролизат HiVeg®, дрожжевой экстракт и экстракт HiVeg® № 1 обеспечивают среду питательными веществами, включая углеродсодержащие и азотсодержащие соединения. Фосфаты поддерживают буферную ёмкость среды.

Все виды Listeria проявляют β-глюкозидазную активность, что выражается в почернении среды. Виды Listeria гидролизуют эскулин, замещённый глюкозид, до глюкозы и эскулетина. Эскулетин взаимодействует с ионами железа из цитрата аммонийного железа FD141 с образованием 6,7-дигидроксикумарина и чёрно-коричневого комплекса. Цитрат аммонийного железа также усиливает рост L. monocytogenes.

Высокая устойчивость Listeria к хлориду натрия используется для подавления роста энтерококков. Хлорид лития также подавляет энтерококки, которые способны гидролизовать эскулин. Рост сопутствующей микрофлоры в значительной степени подавляется добавлением налидиксовой кислоты и гидрохлорида акрифлавина FD125I.

Пробоподготовка и проведение анализа

Начальная суспензия

Бульон используют как разбавляющую жидкость для приготовления начальной суспензии.

Соотношение образца и среды: 25 г образца + 25 мл образца в 225 мл среды M1327 с добавлением 1 флакона FD125I и 2 флаконов FD141.

Первичное обогащение

1. Инкубируйте разведение, приготовленное в половинном бульоне Fraser, при 30 ± 1 °C в течение 24–26 ч.
2. После инкубации предварительно обогащённый образец можно хранить при 5 °C не более 72 ч до переноса в бульон Fraser для вторичного обогащения.
3. Во время инкубации может развиться чёрное окрашивание.

Вторичное обогащение

1. Перенесите 0,1 мл культуры из среды первичного обогащения в 10 мл бульона Fraser для вторичного обогащения.
2. Инкубируйте при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч.
3. Для восстановления дополнительных видов Listeria, отличных от L. monocytogenes, рекомендуется дополнительная инкубация в течение 24 ч.
4. Выполните пересев образцов из первичной и вторичной обогащающих сред на основу агара HiCrome® Listeria Ottaviani–Agosti M1540I и на основу среды Оксфорд для Listeria M1145 или основу агара для идентификации Listeria PALCAM M1064I.
5. Инкубируйте посевы при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч.
6. Для восстановления дополнительных видов Listeria, отличных от L. monocytogenes, рекомендуется дополнительная инкубация при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч.

Культуральные характеристики

Половинная среда Fraser: первичное обогащение, продуктивность

Культуральные характеристики определяли после добавления FD125I и FD141 и инкубации при 30 ± 1 °C в течение 25 ± 1 ч. Последующий пересев выполняли на M1540I с инкубацией при 37 ± 1 °C в течение 48 ± 4 ч.