HiMedia MV1295-500G HiCrome E. coli HiVeg агар

Хромогенный агар HiMedia MV1295-500G HiCrome E. coli HiVeg для обнаружения и количественного определения Escherichia coli в пищевых продуктах. Среда позволяет идентифицировать целевые микроорганизмы без дополнительного подтверждения на мембранных фильтрах или с помощью индольного реагента.

Принцип измерения

Среда HiCrome® E.coli Agar разработана на основе триптон-желчного агара для более быстрого и точного выделения Escherichia coli из пищевых проб. Идентификация основана на определении активности фермента β-глюкуронидазы, который высокоспецифичен для E. coli.

В состав среды входит хромогенный агент X-глюкуронид. Клетки E. coli поглощают X-глюкуронид, и внутриклеточный фермент β-глюкуронидаза расщепляет связь между хромофором и глюкуронидом. Высвобожденный хромофор окрашивает колонии E. coli в сине-зелёный цвет.

Для исключения рисков, связанных с губчатой энцефалопатией (BSE/TSE), животные пептоны полностью заменены растительными (HiVeg® гидролизат и специальный пептон HiVeg®), которые обеспечивают организм углеродом, азотом, длинноцепочечными аминокислотами и витаминами. Синтетический детергент подавляет рост грамположительных микроорганизмов, а хлорид натрия и фосфаты поддерживают осмотический баланс и буферную емкость среды.

Область применения

Среда рекомендуется для изоляции Escherichia coli из следующих типов образцов:

• пищевые продукты;
• вода;
• клинические образцы.

Методика проведения анализа

Подготовка проб

1. Поверхность plated-среды (залитых чашек) высушивают перед использованием.
2. Пищевые образцы разбавляют в соотношении 1:5 или 1:10 стерильной пептонной водой (M028) с концентрацией 0,1 % (масс./об.) и гомогенизируют в блендере или стомачере.
3. Пипеткой переносят 0,5 мл или 1,0 мл гомогенизированной пробы на поверхность агара и распределяют стерильным стеклянным шпателем.

Инкубация и интерпретация

1. Чашки инкубируют при температуре 30 °C в течение 4 часов.
2. Затем переносят в инкубатор при температуре 44 °C на 18 часов.
3. Результат: колонии сине-зелёного цвета свидетельствуют о наличии Escherichia coli.

Приготовление среды

1. Растворить 36,57 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревать до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 lbs) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C, тщательно перемешать и разлить по стерильным чашкам Петри.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Общие параметры:

Контроль качества:

• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до желтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,2 % агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-желтый, прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
• Реакция: pH 7,2 $\pm$ 0,2 для 3,66 % (масс./об.) водного раствора при 25 °C.
• Диапазон pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются после инкубации при 44 °C в течение 18–24 часов.

Ограничения метода

• $\beta$-глюкуронидаза присутствует в 97 % штаммов E. coli; отдельные штаммы могут давать отрицательный результат.
• Некоторые виды Salmonella могут быть $\beta$-глюкуронидаза-положительными.
• Некоторые виды микроорганизмов могут демонстрировать слабый рост из-за вариаций в питательных потребностях.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 15–25 °C.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты должны быть утилизированы путем автоклавирования или сжигания в соответствии с установленными лабораторными процедурами по обращению с инфекционными материалами.