HiMedia MV1295-100G HiCrome E. coli HiVeg агар

Хромогенный агар HiMedia MV1295-100G HiCrome E. coli HiVeg для обнаружения и количественного определения Escherichia coli в пищевых продуктах. Среда позволяет проводить идентификацию без дополнительного подтверждения на мембранных фильтрах или с помощью индельного реагента.

Принцип измерения

Среда HiCrome® E.coli Agar разработана на основе тройного желчного агара (Tryptone Bile Agar) для более быстрого и точного выделения Escherichia coli из пищевых проб. Идентификация основана на определении активности фермента β-глюкуронидазы, который высокоспецифичен для E. coli.

В состав среды входит хромогенный агент X-глюкуронид. Клетки E. coli поглощают X-глюкуронид, и внутриклеточный фермент расщепляет связь между хромофором и глюкуронидом. Высвобожденный хромофор окрашивает колонии E. coli в сине-зелёный цвет.

Для исключения рисков, связанных с БЭС/ТСЭ (губчатой энцефалопатией), животные пептоны полностью заменены на растительные (HiVeg® гидролизат и специальный пептон HiVeg®), которые обеспечивают организм углеродом, азотом, длинноцепочечными аминокислотами и витаминами. Синтетический детергент подавляет рост грамположительных микроорганизмов, а хлорид натрия и фосфаты поддерживают осмотический баланс и буферную емкость среды.

Область применения

Среда рекомендуется для изоляции E. coli из следующих типов образцов:

• пробы воды;
• пищевые продукты;
• клинические образцы.

Методика проведения анализа

Подготовка образцов

1. Поверхность залитой среды перед использованием просушивают.
2. Пищевые образцы разбавляют в соотношении 1:5 или 1:10 стерильной пептонной водой (M028) с концентрацией 0,1 % (масс./об.) и гомогенизируют в блендере или стомачере.
3. Вносят 0,5 мл или 1,0 мл гомогенизированной пробы на поверхность агара и распределяют стерильным стеклянным шпателем.

Инкубация

• Первичная инкубация: 30 °C в течение 4 часов.
• Основная инкубация: 44 °C в течение 18 часов.

Приготовление и стерилизация

1. Суспендировать 36,57 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 lbs) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешать и разлить по стерильным чашкам Петри.

Технические характеристики

• Вес: 100 г
• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до жёлтого цвета
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-жёлтый, прозрачный или слегка опалесцирующий гель
• pH (водного раствора 3,66 % масс./об. при 25 °C): 7,2 $\pm$ 0,2
• Диапазон pH: 7,00–7,40
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,2 % агаром
• Происхождение компонентов: растительное (Animal Free)
• Тип упаковки: ПНД (HDPE)

Состав (г/л)

Культуральные характеристики

Результаты после инкубации при 44 °C в течение 18–24 часов.

Ограничения метода

• $\beta$-глюкуронидаза присутствует в 97 % штаммов E. coli; отдельные штаммы могут давать отрицательный результат.
• Некоторые виды Salmonella могут быть $\beta$-глюкуронидаза-положительными.
• Некоторые виды микроорганизмов могут демонстрировать слабый рост из-за вариаций в питательных потребностях.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 15–25 °C.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать во избежание образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Меры предосторожности и утилизация

• При работе использовать защитные перчатки, одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности при работе с образцами и культурами.
• Загрязненные материалы и использованные среды подлежат обязательной стерилизации в автоклаве или сжиганию перед утилизацией.