Основа селективного HiCrome ECC HiVeg агара HiMedia MV1294-500G — сухая питательная среда на основе растительных пептонов для выявления Escherichia coli и колиформных бактерий в воде и пищевых образцах. HiMedia MV1294-500G применяют для одновременного обнаружения E. coli и общих колиформных бактерий методом посева на поверхность, заливкой чашек или мембранной фильтрацией; для селективности допускается добавление добавки ECC Selective Supplement FD190.

Назначение

Основа селективного хромогенного агара HiCrome ECC HiVeg предназначена для выявления Escherichia coli и колиформных бактерий в образцах воды и пищевых продуктов.

• Тип изделия: основа питательной среды
• Масса: 500 г
• Производитель: HiMedia
• Объекты анализа: пищевые образцы, образцы воды

Состав

Состав среды приведён в расчёте на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация результатов

HiCrome ECC Selective Agar — селективная среда для одновременного выявления Escherichia coli и общего количества колиформных бактерий в образцах воды и пищевых продуктов.

В основе среды используется хромогенная смесь, содержащая два хромогенных субстрата:

• β-D-галактозидаза, вырабатываемая колиформными бактериями, расщепляет один из хромогенов с образованием колоний лососевого или красного цвета.
• β-D-глюкуронидаза, вырабатываемая E. coli, расщепляет X-глюкуронид — второй хромоген.
• Колонии E. coli приобретают тёмно-синюю или фиолетовую окраску вследствие расщепления обоих хромогенов.

Для подтверждения E. coli на колонию тёмно-синего или фиолетового цвета наносят каплю реактива Ковача. Образование вишнёво-красной окраски указывает на положительную реакцию.

L-триптофан усиливает индольную реакцию и повышает надёжность выявления. Специальный пептон, пируват натрия и сорбитол служат источниками азотистых веществ, сбраживаемых углеводов и других необходимых питательных компонентов для роста микроорганизмов. Фосфаты выполняют буферную функцию.

Формула среды способствует восстановлению и быстрому росту даже сублетально повреждённых колиформных бактерий. Tergitol подавляет грамположительные бактерии, а также некоторые грамотрицательные бактерии, не относящиеся к колиформным. Добавление ECC Selective Supplement FD190 усиливает подавление сопутствующей гетерогенной микрофлоры.

В HiCrome ECC Selective HiVeg Agar животные пептоны полностью заменены растительными пептонами, что исключает риски, связанные с пептонами животного происхождения, включая риски губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота и трансмиссивных губчатых энцефалопатий (BSE/TSE).

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию из 26,48 г сухой основы в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 фунтов/кв. дюйм (≈0,103 МПа; ≈1,03 бар) при 121 °C в течение 15 мин.
4. При необходимости асептически добавьте восстановленное содержимое 1 флакона добавки ECC Selective Supplement FD190 в предварительно охлаждённую стерильную среду при температуре 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте среду.
6. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

После приготовления среда может иметь лёгкую мутность; это не влияет на рабочие характеристики среды.

Методики посева и подтверждения

Среду инокулируют одним из следующих способов:

• методом заливки чашек;
• нанесением образца на поверхность разлитой и застывшей среды;
• мембранно-фильтрационным методом.

Для подтверждения E. coli на колонию тёмно-синего или фиолетового цвета добавляют каплю реактива Ковача. Положительной считается реакция с образованием вишнёво-красной окраски.

Пробоотбор и обращение с образцами

Пищевые образцы

Для отбора и обработки пищевых образцов применяйте соответствующие методики, предусмотренные руководствами.

Образцы воды

Для отбора и обработки образцов воды применяйте соответствующие методики, предусмотренные руководствами и местными нормативами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности, установленные соответствующими руководствами.
• Требования безопасности приведены в индивидуальных паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. β-глюкуронидаза присутствует у 97 % штаммов E. coli, однако отдельные штаммы E. coli могут давать отрицательную реакцию.
2. Некоторые виды микроорганизмов могут демонстрировать слабый рост вследствие различий в пищевых потребностях.

Технические характеристики и контроль качества

Внешний вид сухой основы

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до розового цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,0%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: в чашках Петри образуется светло-розовый прозрачный или слегка опалесцирующий гель.

Реакция среды

Реакция: водный раствор с массово-объёмной концентрацией 2,65 % при 25 °C.

• pH: 6,8 ± 0,2

Диапазон pH

Диапазон pH: 6,60–7,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

• — соответствующие номера WDCM.

— ранее обозначался как Enterobacter aerogenes.

Условия хранения и срок годности

• Хранение сухой основы: при 15–25 °C в плотно закрытом контей