HiMedia MV1145-500G Основа HiVeg среды Листерия Оксфорд

Основа питательной среды HiMedia MV1145-500G Основа HiVeg среды Листерия Оксфорд — порошковая основа селективной среды для выделения и идентификации видов Listeria, масса упаковки 500 г. Применяется для анализа клинических, пищевых и молочных образцов при хранении продукта при 10–30 °C, а приготовленной среды — при 2–8 °C.

Назначение

Основа среды HiMedia MV1145-500G рекомендована для селективного выделения и идентификации видов Listeria.

Типы исследуемых образцов

• Клинические образцы: ткани и биологические жидкости.
• Пищевые и молочные образцы.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 27,75 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки Oxford Selective Supplement (FD071) или одного флакона селективной добавки CM Selective Supplement (FD126).
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Listeria monocytogenes — единственный вид рода Listeria, имеющий значение как возбудитель заболеваний человека. Listeria seeligeri, Listeria welshimeri и Listeria ivanovii связывают с заболеваниями животных. Все виды Listeria могут быть патогенны для овец и крупного рогатого скота.

Положительная диагностика листериоза возможна только при выделении и культивировании ответственных бактерий из образцов крови или спинномозговой жидкости поражённых организмов.

Основа среды «Листерия Оксфорд» разработана на основе состава, описанного Curtis и соавторами, для выделения L. monocytogenes из клинических и пищевых образцов. В основе HiVeg® используются растительные пептоны вместо пептонов животного происхождения, благодаря чему среда не содержит рисков, связанных с губчатой энцефалопатией крупного рогатого скота и трансмиссивными губчатыми энцефалопатиями (BSE/TSE).

• Специальный пептон HiVeg® служит источником необходимых питательных веществ для микроорганизмов.
• Кукурузный крахмал нейтрализует образующиеся токсичные метаболиты.
• Хлорид лития и антибиотики подавляют грамотрицательные бактерии и большинство грамположительных организмов; отдельные штаммы стафилококков могут расти в виде колоний, отрицательных по гидролизу эскулина.
• Циклогексимид снижает грибковую контаминацию.
• Цефотетан и фосфомицин подавляют избыточный рост бактерий.
• Акрифлавин, сульфат колистина и хлорид лития подавляют бактерии, отличные от видов Listeria.
• В качестве альтернативы можно добавить моксалактам (FD126), подавляющий как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии.

L. monocytogenes гидролизует эскулин до эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с ионами железа, в результате чего вокруг колоний образуются чёрные зоны.

Селективность среды достаточна для выделения и дифференциации микроорганизмов при прямом поверхностном посеве, однако рекомендуется предварительно разбавлять посевной материал; разбавление особенно важно для сильно загрязнённых образцов. Методика выделения зависит от исследуемого материала. Для всех образцов рекомендуется селективное и холодовое обогащение.

Обработка фекальных и биологических образцов

1. Гомогенизируйте образец в 0,1%-ной пептонной воде HiVeg® (MV028).
2. Внесите 0,1 мл полученной суспензии непосредственно на селективную среду для Listeria или в селективный обогатительный бульон.
3. Инкубируйте селективный обогатительный бульон при 30 °C в течение 7 суток.
4. После инкубации дополнительно высейте материал на селективную среду для Listeria.

Для пищевых и образцов окружающей среды обычно применяют селективное обогащение.

Выделение Listeria из пищевых образцов

Методика предназначена для пищевых образцов, включая молоко и молочные продукты.

1. Добавьте 25 мл или 25 г образца к 225 мл обогатительного бульона для Listeria UVM (MV890A).
2. Тщательно гомогенизируйте и перемешайте.
3. Инкубируйте в течение 48 ч при 30 °C.
4. Выполните штриховой посев обогащённой культуры на среду «Листерия Оксфорд».
5. Инкубируйте аэробно в течение 48 ч при 37 °C.
6. Отберите 5 типичных колоний, положительных по эскулину, и инокулируйте их на соевый агар HiVeg® (MV290).
7. Инкубируйте в течение 24 ч.
8. Используйте полученные колонии для биохимического подтверждения.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления селективной добавки Oxford Selective Supplement (FD071) или CM Selective Supplement (FD126) и инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.
** Ранее обозначался как Bacillus subtilis subsp. spizizenii.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, сыпучий порошок от светло-жёлтого до тёмно-жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,0%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель тёмно-янтарного цвета с голубоватым оттенком.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 5,55 % масс./об. при 25 °C: pH 7,0 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 6,80–7,20.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методики отбора и обработки проб согласно установленным руководствам. Для клинических образцов используйте соответствующие методы обращения с материалом согласно утверждённым руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Руководства по безопасности могут быть приведены в отдельных паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Отдельные микроорганизмы имеют различные требования к росту и могут демонстрировать неодинаковые характеристики роста на среде.
2. Каждая серия среды протестирована на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). Для любого конкретного микроорганизма, не указанного в COA, пользователю рекомендуется валидировать среду с учётом индивидуальных требований.
3. Для окончательной идентификации выделенных организмов необходимы дополнительные биохимические тесты.

Рабочие характеристики

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Хранение и срок годности

• Темпера